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大肠杆菌DH5a和XL1-Blue之间如何区分
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想请教各位高手，大肠杆菌DH5a和XL1-Blue之间如何区分？？如果两种菌弄混了怎么区别开？ 感受态细胞容易失活吗？在什么情况下比较容易失活？ 谢谢各位~~ [ Last edited by 1949stone on 2011-7-25 at 02:53 ] |
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西瓜
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【答案】应助回帖
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dhd997(金币+5): 辛苦 2011-07-24 09:12:29
亲爱的文妞(金币+4): 好的，谢谢~~辛苦啦，嘿嘿~~ 2011-07-24 12:10:27
dhd997(金币+5): 辛苦 2011-07-24 09:12:29
亲爱的文妞(金币+4): 好的，谢谢~~辛苦啦，嘿嘿~~ 2011-07-24 12:10:27
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DH5a不带任何抗性，XL1-Blue具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性，可以用抗性把它们区分开。 感受态细胞做好之后冻在-80℃，解冻了就要用了，不然再冻起来效率也已经不行了。 下面的资料是网上找来的： 常用感受态细胞的基因型和区别 Xl1-Blue菌株 基因型： endA1 gyrA96（nalR） thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F'[Tn10 proAB+ lacIq Δ（lacZ）M15] hsdR17（rK- mK+）。 特点： 具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。 用途： 分子克隆和质粒提取。 BL21（DE3）菌株 基因型： F- ompT gal dcm lon hsdSB（rB- mB-） λ（DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5）。 特点： 该菌株用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子，该区整合于 BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。 用途： 蛋白质表达。 BL21（DE3）ply菌株 基因型： F- ompT gal dcm lon hsdSB（rB- mB-） λ（DE3） pLysS（cmR）。 特点： 该菌株带有pLysS,具有氯霉素抗性。此质粒还有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。 适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。 用途： 蛋白质表达。 DH5α菌株 基因型： F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ（lacZYA-argF）U169, hsdR17（rK-, λ-）。 特点： 一种常用于质粒克隆的菌株。 其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和 endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。 用途： 分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。 JM109菌株 基因型： endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ Δ（lac-proAB） e14- [F' traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]hsdR17（rK-mK+）。 特点： 部分抗性缺陷，适合重复基因表达， 可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。 用途： 分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。 |
4楼2011-07-23 21:02:26
豆豆鱼
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3楼2011-07-23 20:36:54
10