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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS-PAGE 凝胶电泳的Marker使用
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空蓝Y劫

新虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE 凝胶电泳的Marker使用

SDS-PAGE 凝胶电泳的Marker使用前要煮沸吗？如果煮了会对电泳有什么影响？

本人新手，刚接触凝胶电泳，听说Marker，是蛋白，严禁煮沸。不小心煮了下。结果也没见什么不好啊！

还有接着做westen blot 实验的时候老师说该出标记的Marker 位置没出标记。是不是我煮了marker的原因？

但其他出标记的样有 的因为是菌体的原因，上样前也有煮沸过啊，为什么它们出标记了煮的Marker不出标记呢？？
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1楼 2011-07-22 12:55:32
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空蓝Y劫

新虫 (小有名气)
我想问的是：

1.SDS-PAGE电泳时Marker煮沸与否对电泳结果有无影响，若有，有何种影响。

2.westen blot实验中硝酸纤维素膜上是否出现电泳条带与蛋白是否变性有无关系。
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2楼2011-07-22 13:16:37
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫

【答案】应助回帖

★ ★
空蓝Y劫(金币+1): 2011-07-22 17:32:11
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-22 19:11:01
空蓝Y劫(金币+4): 谢谢了 2011-08-02 14:14:25
引用回帖:
Originally posted by 空蓝Y劫 at 2011-07-22 12:55:32:
SDS-PAGE 凝胶电泳的Marker使用前要煮沸吗？如果煮了会对电泳有什么影响？

本人新手，刚接触凝胶电泳，听说Marker，是蛋白，严禁煮沸。不小心煮了下。结果也没见什么不好啊！

还有接着做westen blot 实验的 ...

蛋白电泳分变性电泳和非变性电泳，SDS-PAGE 本身就是电泳，所以电泳样品和marker要经过变性处理（通常就是100度，10min）。但是现在有预染的marker，已经处理完毕了，而且在电泳的时候能过在胶上看到相应的分子量条带。然而普通的marker就需要经过变性处理了。
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梦在路就在！
3楼2011-07-22 14:30:24
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jackie_jang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-07-22 19:11:10
SDS-PAGE 凝胶电泳的Marker使用前必须煮沸。说明书上应该有配置方法。
应该没有关系。
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流动的水没有形状，漂流的风找不到踪迹。
4楼2011-07-22 16:43:16
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-07-22 19:11:16
WB使用的marker是预染的不用煮沸，你的marker说明书上应该有使用条件吧。
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5楼2011-07-22 18:25:03
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空蓝Y劫

新虫 (小有名气)
★
silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-07-23 17:11:34
补充说明一下。我所说的westen blot 中出现问题的Marker 是老师自己配的，是作为样品加在电泳中的，具体成分不明。westen blot中的Marker 是购买的，缩写PPM。PPM没问题。
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6楼2011-07-23 08:24:30
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ytf149

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 热心虫友，欢迎常来交流 2011-07-23 23:07:05
Marker有预染和普通的。上样前，蛋白样品65℃预热是必需的，否则电泳后一些蛋白会沉积在分离胶的上沿，出现一条蛋白杂带。煮沸应该没有关系吧，以前我做SDS-PAGE 的时候Marker也煮沸了的，还是出条带，你看下你购买的marker的说明说嘛，都会有使用说明的。
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加油~
7楼2011-07-23 20:58:16
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skynoline

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

SDS-PAGE是变性电泳，所以煮了没事，而且必须煮，沸水浴3-5min.
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8楼2011-07-24 09:37:19
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nayitian_nan

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

SDS-PAGE是变性电泳，应该煮的，最好看看说明书。marker没出，原因可能是分装时候的浓度问题，或者是胶的浓度没有配好，我们的marker有六个蛋白，有时候就跑出5个
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其实，猪也有理想
9楼2011-07-24 11:04:02
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guangming111

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

希望能下下来！好好学习！
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10楼2011-08-02 10:05:48
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