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新虫 (初入文坛)

[求助] 兼并引物PCR连T载体后,怎么鉴定有没有连上

我用简并引物扩一段未知序列,扩出来后连T载体,怎么鉴定有没有连上呢,不能用简并引物去扩吧,酶切的话不知道目的序列的酶切位点情况,只能选几个试试 ,但效果都不理想啊,这一时半会也不知上哪去找通用引物,怎么办呢,急!
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1949stone: 我要把你的和冼亮淀粉酶 整理下 发个帖子 2011-07-23 01:38:28
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-22 21:43:28:
EB是有毒物质,我们实验室从不把它加到电泳槽里,只设置专门的染缸来染色,染缸放置在黑暗密闭处。建议你也别把EB放在开放的地方。

条带的大小跟显影亮度无关,有关的只是含量。即使条带很大,达到10kb,含 ...

理论上讲条带亮度是跟质量(比如几ng)成线性关系的,这一点是毋庸置疑的,但是由于EB的泳动结果使EB在胶中的含量成递减的状态,所以实际结果是由此而显得越靠近点样孔的地方越亮,如果你是个细心的人,从mark的条带能看出区别的(mark中有一条最的带,其余的带的质量都相同)

还有冼亮淀粉酶朋友给你的解释很专业,我也看了之后很有收获!
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
18楼2011-07-22 23:06:23
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-22 08:18:15
试着跑一个电泳,PCR产物是一条带,T载体也是一条带,连接成功的是另一条带,但是要求DNA较多,连接体系不至于跑了电泳就用完了。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-07-22 07:28:06
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): good 2011-07-22 11:55:04
可以用引物扩增一下试试;
当然了,序列你既然都知道,何不找一个合适的酶切位点呢?酶切验证一下即可。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-07-22 08:25:50
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶


西瓜(金币+1): 鼓励 2011-07-22 11:55:16
目的序列的酶切位点可以用软件查找的
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2011-07-22 08:34:49
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