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汕头大学海洋科学接受调剂
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jinglh8288

木虫 (正式写手)

[求助] HPLC 基线很不稳定怎么回事?

最近利用HPLC走流动相空白发现在220nm下检测,基线很不稳定,最初维持在0附近,几分钟后基线就升到上百个单位,为一个大峰包,随后又迅速下降到负的200
-300个单位,然后基本平稳,怎么回事呢?用的是屈臣氏的蒸馏水和乙腈梯度洗脱。之前用的是娃哈哈纯净水,走梯度总是有一个几十甚至是上百的大峰,但基线很平;现在大峰变得很小,只有几个单位,但是基线很不平……(梯度条件:B%:50%——5min—100% —10min—100%)。50%异丙醇冲系统半个小时后254nm漂移略 有改善,但220nm无变化,跪求各位高手指点啊!很急,谢谢!!
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一分耕耘,一分收获。
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ltxin2009

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

jinglh8288(金币+1): 谢谢啊…… 2011-07-20 08:32:40
是梯度洗脱峰吧,梯度变化也太快了。
2楼2011-07-19 15:24:36
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jinglh8288

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by ltxin2009 at 2011-07-19 15:24:36:
是梯度洗脱峰吧,梯度变化也太快了。

30min乙腈从50%变化到100%也是基线很不稳啊……220的波动使检测根本没法进行!
一分耕耘,一分收获。
3楼2011-07-20 08:33:59
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ltxin2009

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by jinglh8288 at 2011-07-20 08:33:59:
30min乙腈从50%变化到100%也是基线很不稳啊……220的波动使检测根本没法进行!

什么仪器?
4楼2011-07-20 08:39:46
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jinglh8288

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by ltxin2009 at 2011-07-20 08:39:46:
什么仪器?

刚买两个月的安捷伦1260
一分耕耘,一分收获。
5楼2011-07-21 07:51:55
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hjx990

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

jinglh8288(金币+3): 谢谢! 2011-07-21 12:58:33
我是用岛津的液谱。一次听负责维修的工程师说起过,液谱走基线很不稳定,有可能是柱子有问题。建议你清洗预处理柱子,检查柱子情况。
6楼2011-07-21 08:55:08
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swt1898

铁虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

jinglh8288(金币+4): 谢谢!等度没问题! 2011-07-21 12:56:39
多方面原因啊,新仪器应该不是氘灯的问题,柱子应该也是新的,走一下等度看看是否也是,很可能是试剂的问题
7楼2011-07-21 11:30:50
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jinglh8288

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by swt1898 at 2011-07-21 11:30:50:
多方面原因啊,新仪器应该不是氘灯的问题,柱子应该也是新的,走一下等度看看是否也是,很可能是试剂的问题

等度没问题就证明是试剂的问题么?100%乙腈,80%乙腈 ,10%乙腈都没有问题……
一分耕耘,一分收获。
8楼2011-07-21 12:57:40
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jinglh8288

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by hjx990 at 2011-07-21 08:55:08:
我是用岛津的液谱。一次听负责维修的工程师说起过,液谱走基线很不稳定,有可能是柱子有问题。建议你清洗预处理柱子,检查柱子情况。

有一根新柱子都没有用过,刚用时总是有很多杂峰,后来就开始出现基线漂移严重的现象,再换另外一根柱子B也出现了基线漂移严重的现象,之前那根柱子B是走梯度总有一个大峰出来……
一分耕耘,一分收获。
9楼2011-07-21 13:00:37
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绿茶清香

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

jinglh8288(金币+2): 恩,确实是啊…… 2011-07-21 15:20:15
柱子一定 要洗干净,流动相配制的时候一定注意,不要有杂质了~~外面卖的水也不好说。。
10楼2011-07-21 14:45:08
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