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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 表达载体构建的相关问题
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
Originally posted by 千king寻 at 2011-07-21 10:34:11:
　金属浴：采用微电脑控制和半导体制冷技术制造的一款恒温金属浴产品，仪器可配置多种模块，可广泛应用于样品的保存、各种酶的保存和反应、核酸和蛋白质的变性处理、PCR 反应、电泳的预变性和血清凝固等。  
    ...

呵呵，那我明白是什么了。跟PCR仪一样，通过加热金属块，再加热样品的吧。那玩意我们叫干浴锅，英文叫dry bath。我们实验室有几台labnet的，加热EP管的，不过很多人喜欢往金属模块的孔里加水，变成水浴锅用……
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11楼2011-07-21 11:26:35
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yrzhao08

铁虫 (初入文坛)
要想缩短双酶切的时间可以用fermentas的快速内切酶，很好用一般30分钟之内就可以酶切完全。我们实验室都是用这个，很好用，大大缩短了时间！
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12楼2011-07-21 11:43:14
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lxjwishes

银虫 (正式写手)
现在用快速T4连接酶，Fermentas的，挺好的，一般3个小时就可以转化了
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pleasemywings,flymeaway.
13楼2011-08-11 16:10:33
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
497002楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2011-07-20 21:12:08
金属浴是什么？可以在水浴锅中或者直接在PCR仪上啊...

水浴锅怎么弄16度？楼主莫非你们那室温低于16度？！
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14楼2012-11-29 22:29:16
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 千king寻 at 2011-07-20 14:04:28
双酶切37度水浴2——3个小时，之后琼脂糖凝胶电泳观察条带，若条带正确则切胶回收，此时回收的为带有两个酶切位点的目的片段。该目的片段与已经带有该酶切位点的载体进行连接，若用T4连接酶，则需16度金属浴过夜连接 ...

"此时回收的为带有两个酶切位点的目的片段。该目的片段与已经带有该酶切位点的载体进行连接，"

1，载体双酶切后需要纯化回收吗？
2，转化液涂板是否需要加入IPTG诱导（PET载体，非T载体）？
我每次按上述过程操作后能够得到不少斑，但是大部分都是假阳性，不知什么原因
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15楼2013-10-24 22:56:38
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
"此时回收的为带有两个酶切位点的目的片段。该目的片段与已经带有该酶切位点的载体进行连接，"

1，载体双酶切后需要纯化回收吗？
2，转化液涂板是否需要加入IPTG诱导（PET载体，非T载体）？
我每次按上述过程操作后能够得到不少斑，但是大部分都是假阳性，不知什么原因
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16楼2013-10-24 22:56:47
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