[交流] 测序的问题 已有5人参与

Originally posted by lxj341401 at 2011-07-06 13:59:15:
测出来是你要的话不用的，测一次就够了。如果出现层叠峰、无信号等情况可以考虑重新送样测序。

Originally posted by friya0910 at 2011-07-06 14:42:15:
我克一个基因，挑了三个单克隆测序，可是结果都不一样，但是差得不多，所以在想会不会是测序的问题，但是看峰图都挺好的呀！难道我的基因是多拷贝？

Originally posted by lxj341401 at 2011-07-06 15:17:20:
应该不是测序的问题，现在测序结果还是比较可信的。三个单克隆三个不同结果也可以理解，基因应该是单拷贝的，都连进去了，但连的是不同的基因，是前面实验的问题。三个里面如果有一个是你要的，就挑取那个单克 ...

Originally posted by friya0910 at 2011-07-06 17:52:54:
现在的问题是这三个非常接近的说，而且我也确定不了哪个是我要的，非常纠结呢！

Originally posted by lxj341401 at 2011-07-06 18:48:13:
不知道你三个接近到什么程度？如果这基因是PCR来的，只是几个碱基不一样，换个高保真的聚合酶重新弄过；如果你的目的是要表达蛋白的话也无需纠结，三个一起做表达测定活性看看。

Originally posted by amilie030312 at 2011-07-06 23:30:51:
如果相差不大说明你做克隆时用的PCR酶不是高保真酶，估计你被商家忽悠了。如果差距不叫大可以重测一下，有重叠峰的话测序公司一般是会告诉你的，如果酶也换了高保真酶再测序还发现有不一样的，那就有可能是不同的 ...

Originally posted by friya0910 at 2011-07-07 15:34:15:
怎么说呢，我的目的片段是297bp，然后送三个样，测出来有三个位点是不一样的，有的是1、2一样，3不一样，有的是2、3一样，1不一样；翻译成蛋白，1和2完全一样，3号有一个位点和它们不一样；我刚咨询了一下公司 ...