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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测序的问题
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friya0910

新虫 (正式写手)

[交流] 测序的问题 已有5人参与

想请教一下大家一般测序公司的准确率是多少啊？需要测重复吗？
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1楼 2011-07-06 13:37:29
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friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2011-07-06 23:30:51:
如果相差不大说明你做克隆时用的PCR酶不是高保真酶，估计你被商家忽悠了。如果差距不叫大可以重测一下，有重叠峰的话测序公司一般是会告诉你的，如果酶也换了高保真酶再测序还发现有不一样的，那就有可能是不同的 ...

怎么说呢，我的目的片段是297bp，然后送三个样，测出来有三个位点是不一样的，有的是1、2一样，3不一样，有的是2、3一样，1不一样；翻译成蛋白，1和2完全一样，3号有一个位点和它们不一样；我刚咨询了一下公司，说他们的酶的保真性能达到95%以上，不应该是错配。测序的峰图也挺好的。选了两个样重测以后还是和以前一样，应该可以排除测序出现错误的问题。还有弱弱的问一下，什么叫剪切子不一样啊？
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9楼2011-07-07 15:34:15
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
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1949stone(金币+1): 叠峰 最闹心 2011-07-06 14:14:06
测出来是你要的话不用的，测一次就够了。如果出现层叠峰、无信号等情况可以考虑重新送样测序。
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2楼2011-07-06 13:59:15
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friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-07-06 13:59:15:
测出来是你要的话不用的，测一次就够了。如果出现层叠峰、无信号等情况可以考虑重新送样测序。

我克一个基因，挑了三个单克隆测序，可是结果都不一样，但是差得不多，所以在想会不会是测序的问题，但是看峰图都挺好的呀！难道我的基因是多拷贝？
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3楼2011-07-06 14:42:15
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+3): good 2011-07-06 17:02:26
引用回帖:
Originally posted by friya0910 at 2011-07-06 14:42:15:
我克一个基因，挑了三个单克隆测序，可是结果都不一样，但是差得不多，所以在想会不会是测序的问题，但是看峰图都挺好的呀！难道我的基因是多拷贝？

应该不是测序的问题，现在测序结果还是比较可信的。三个单克隆三个不同结果也可以理解，基因应该是单拷贝的，都连进去了，但连的是不同的基因，是前面实验的问题。三个里面如果有一个是你要的，就挑取那个单克隆，其他两个单克隆都不要了，继续后面实验，如果都不是你要的，就挑别的单克隆去测序了或者重新转化了。
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4楼2011-07-06 15:17:20
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