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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测序的问题
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friya0910

新虫 (正式写手)

[交流] 测序的问题已有5人参与

想请教一下大家一般测序公司的准确率是多少啊？需要测重复吗？
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1楼2011-07-06 13:37:29
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friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-07-06 18:48:13:
不知道你三个接近到什么程度？如果这基因是PCR来的，只是几个碱基不一样，换个高保真的聚合酶重新弄过；如果你的目的是要表达蛋白的话也无需纠结，三个一起做表达测定活性看看。

其实我之前在ＤＮＡ上做PCR的时候就发现这个基因是多拷贝的，现在做表达呢，问题是我送出去测3个样就测出来三个序列，我怕还有更多的拷贝呢，我打算再送三个样测测看。其实互相之间碱基差得不到10个吧，翻译成蛋白也就差两三个氨基酸。
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7楼2011-07-06 20:29:14
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
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1949stone(金币+1): 叠峰 最闹心 2011-07-06 14:14:06
测出来是你要的话不用的，测一次就够了。如果出现层叠峰、无信号等情况可以考虑重新送样测序。
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2楼2011-07-06 13:59:15
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friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-07-06 13:59:15:
测出来是你要的话不用的，测一次就够了。如果出现层叠峰、无信号等情况可以考虑重新送样测序。

我克一个基因，挑了三个单克隆测序，可是结果都不一样，但是差得不多，所以在想会不会是测序的问题，但是看峰图都挺好的呀！难道我的基因是多拷贝？
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3楼2011-07-06 14:42:15
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+3): good 2011-07-06 17:02:26
引用回帖:
Originally posted by friya0910 at 2011-07-06 14:42:15:
我克一个基因，挑了三个单克隆测序，可是结果都不一样，但是差得不多，所以在想会不会是测序的问题，但是看峰图都挺好的呀！难道我的基因是多拷贝？

应该不是测序的问题，现在测序结果还是比较可信的。三个单克隆三个不同结果也可以理解，基因应该是单拷贝的，都连进去了，但连的是不同的基因，是前面实验的问题。三个里面如果有一个是你要的，就挑取那个单克隆，其他两个单克隆都不要了，继续后面实验，如果都不是你要的，就挑别的单克隆去测序了或者重新转化了。
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4楼2011-07-06 15:17:20
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