应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测序的问题
252/3返回列表上一页123下一页
查看: 1885  |  回复: 24
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2011-07-07 23:42:22:
不用说了，你被忽悠了，换一家专业点的公司买酶吧。说吧，你用的啥牌子的酶啊？让大家共同来批判一下引以为戒。
不过也不一定，我觉得第一个和第二个没有引起编码改变的倒是可以接受的，是不是同源密码啊，但 ...

我用的是天根的一步法RT-PCR试剂盒，试剂盒里用的是热启酶，我咨询过他们公司，说是酶的保真性还是挺好的呀，而且他们的技术人员还跟我说290多的片段就出现三个位点的差异，应该不是错配的问题，错配的概率没有那么高，我都糊涂了。我之前在DNA上扩增的时候就发现这个基因是多拷贝的，内含子的差异非常大，但翻译成蛋白的差异就不是很大，您觉得会不会是基因本身的问题啊？
赞一下 回复此楼
11楼2011-07-08 09:27:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2011-07-07 23:42:22:
不用说了，你被忽悠了，换一家专业点的公司买酶吧。说吧，你用的啥牌子的酶啊？让大家共同来批判一下引以为戒。
不过也不一定，我觉得第一个和第二个没有引起编码改变的倒是可以接受的，是不是同源密码啊，但 ...

老师说可能是基因家族数量的问题，说如果深入研究说不定能发篇不错的文章，可是如果是基因家族的话，会差别这么小吗？我本来的实验方向是要做蛋白表达的，现在我都糊涂了，不知道下面该怎么去做了，望大侠指点一下啊！
赞一下 回复此楼
12楼2011-07-08 09:30:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
酶的问题吧！！
回复此楼
jiayoubashaonian
13楼2011-07-08 09:56:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-07-10 21:35:54
先换个好点的酶扩扩看吧，先把酶的问题引起的错配避免掉再说下面的吧，我当年被Takara的酶忽悠的就差点误入歧途了，以为我发现了啥举世瞩目的神奇结果呢，最后证明只是酶保真性不行，出现错配了，浪费了我的大好青春啊
赞一下(2人) 回复此楼
14楼2011-07-10 19:20:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！
多送几个克隆？
回复此楼
15楼2011-07-10 19:34:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by xp198766 at 2011-07-10 19:34:27:
多送几个克隆？

挑了６个单克隆，送了三个，剩下的三个放４度保存了３天，然后加了含有抗生素的ＬＢ里摇，摇出来以后再送出去测序，可是结果很奇怪，三个里只有一个正常，一个出现了碱基缺失，另一个压根找不到下游引物，ＴＡ克隆位点里的片段大小也不对，可是之前菌落ＰＣＲ的片段大小是对的，这是不是跟重摇一次又关啊？困惑了！
赞一下 回复此楼
16楼2011-07-10 19:44:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by friya0910 at 2011-07-10 19:44:01:
挑了６个单克隆，送了三个，剩下的三个放４度保存了３天，然后加了含有抗生素的ＬＢ里摇，摇出来以后再送出去测序，可是结果很奇怪，三个里只有一个正常，一个出现了碱基缺失，另一个压根找不到下游引物，ＴＡ ...

平板不在了吗？再挑几个试试呢？或者重新做，我觉得如何是做表达的话，看看能不能联到表达载体上面再测试
赞一下(1人) 回复此楼
17楼2011-07-10 19:46:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by xp198766 at 2011-07-10 19:46:54:
平板不在了吗？再挑几个试试呢？或者重新做，我觉得如何是做表达的话，看看能不能联到表达载体上面再测试

平板还在呢！您的意思是随便取一个做表达吗？问题是有不一样的，我也不知道取哪条做表达比较好啊，还是都做呢？而且我送三个样三个都不一样，我怕还有更多的不同序列呢！
赞一下 回复此楼
18楼2011-07-10 19:59:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by friya0910 at 2011-07-10 19:59:58:
平板还在呢！您的意思是随便取一个做表达吗？问题是有不一样的，我也不知道取哪条做表达比较好啊，还是都做呢？而且我送三个样三个都不一样，我怕还有更多的不同序列呢！

我觉得是不是可以先酶切，多连接几个菌到表达载体上，先去测序，测序准确的再继续做表达。。
赞一下(1人) 回复此楼
19楼2011-07-10 20:08:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by xp198766 at 2011-07-10 20:08:03:
我觉得是不是可以先酶切，多连接几个菌到表达载体上，先去测序，测序准确的再继续做表达。。

现在问题是我也不知道准确的序列是什么，因为我做的是和别人文献不同的百合品种，所以有可能会出现差异的！而且这个基因应该是多拷贝的，都不知道别人是怎么做到单一序列的，老师说估计他们可能也是随便取了一条做表达的！
赞一下 回复此楼
20楼2011-07-10 20:16:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 friya0910 的主题更新
252/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学硕318求调剂 +14 February_Feb 2026-03-01 16/800 2026-03-02 11:17 by yuchj
[考研] 0856材料与化工，270求调剂 +8 YXCT 2026-03-01 9/450 2026-03-02 11:01 by 无际的草原
[考研] 材料调剂 +6 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 7/350 2026-03-02 10:42 by Jy?
[考研] 275求调剂 +3 L-xin? 2026-03-01 6/300 2026-03-02 10:22 by 热情沙漠
[考研] 材料学调剂 +10 提神豆沙包 2026-02-28 12/600 2026-03-02 09:26 by 李老师！
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +3 Qwertyuop 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:18 by aaadim
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +3 weizhong123 2026-03-01 3/150 2026-03-01 21:42 by 公瑾逍遥
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考研] 291分工科求调剂 +9 science饿饿 2026-03-01 10/500 2026-03-01 18:55 by 18137688336
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二专硕 +10 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:12 by yc258
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭