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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测序的问题
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friya0910

新虫 (正式写手)

[交流] 测序的问题 已有5人参与

想请教一下大家一般测序公司的准确率是多少啊？需要测重复吗？
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1楼 2011-07-06 13:37:29
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friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2011-07-07 23:42:22:
不用说了，你被忽悠了，换一家专业点的公司买酶吧。说吧，你用的啥牌子的酶啊？让大家共同来批判一下引以为戒。
不过也不一定，我觉得第一个和第二个没有引起编码改变的倒是可以接受的，是不是同源密码啊，但 ...

我用的是天根的一步法RT-PCR试剂盒，试剂盒里用的是热启酶，我咨询过他们公司，说是酶的保真性还是挺好的呀，而且他们的技术人员还跟我说290多的片段就出现三个位点的差异，应该不是错配的问题，错配的概率没有那么高，我都糊涂了。我之前在DNA上扩增的时候就发现这个基因是多拷贝的，内含子的差异非常大，但翻译成蛋白的差异就不是很大，您觉得会不会是基因本身的问题啊？
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11楼2011-07-08 09:27:10
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
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1949stone(金币+1): 叠峰 最闹心 2011-07-06 14:14:06
测出来是你要的话不用的，测一次就够了。如果出现层叠峰、无信号等情况可以考虑重新送样测序。
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2楼2011-07-06 13:59:15
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friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-07-06 13:59:15:
测出来是你要的话不用的，测一次就够了。如果出现层叠峰、无信号等情况可以考虑重新送样测序。

我克一个基因，挑了三个单克隆测序，可是结果都不一样，但是差得不多，所以在想会不会是测序的问题，但是看峰图都挺好的呀！难道我的基因是多拷贝？
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3楼2011-07-06 14:42:15
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+3): good 2011-07-06 17:02:26
引用回帖:
Originally posted by friya0910 at 2011-07-06 14:42:15:
我克一个基因，挑了三个单克隆测序，可是结果都不一样，但是差得不多，所以在想会不会是测序的问题，但是看峰图都挺好的呀！难道我的基因是多拷贝？

应该不是测序的问题，现在测序结果还是比较可信的。三个单克隆三个不同结果也可以理解，基因应该是单拷贝的，都连进去了，但连的是不同的基因，是前面实验的问题。三个里面如果有一个是你要的，就挑取那个单克隆，其他两个单克隆都不要了，继续后面实验，如果都不是你要的，就挑别的单克隆去测序了或者重新转化了。
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4楼2011-07-06 15:17:20
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