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terry890

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[求助] 梯度过柱洗脱

梯度过柱洗脱，如果梯度变化过大会有什么影响？是有气泡吗？

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1楼 2011-07-05 15:32:07

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woshiqq23

铜虫 (初入文坛)

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引用回帖:

Originally posted by 豆哥 at 2011-07-05 17:05:33:
换梯度时，要特意留一些上一梯度的溶剂在柱子上端。将下一个梯度的溶剂装在分液漏斗中（漏斗上端密闭，下端打开），放在柱子上面，这样柱子下端流出一滴，分液漏斗就会补充一滴，既可以控制柱子中溶剂的高度不变， ...

楼上第三条说的很有Idea。我想问下，这个“线性梯度洗脱”听着是好，分的时候样品要是能做到类似梯度制备的话岂不更好（像HPLC那样），若是量大的话分时也会交叉，这个线性梯度听着很好，二楼有具体实践么？可否详解一二，觉得很好YE

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10楼2011-07-17 12:32:36

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豆哥

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【答案】应助回帖

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novus(金币+1, EPI+1): 说的不错！ 2011-07-05 20:06:46

换梯度时，要特意留一些上一梯度的溶剂在柱子上端。将下一个梯度的溶剂装在分液漏斗中（漏斗上端密闭，下端打开），放在柱子上面，这样柱子下端流出一滴，分液漏斗就会补充一滴，既可以控制柱子中溶剂的高度不变，从而使柱流速稳定；又可以使分液漏斗中流出的每一滴溶剂都被下面的溶剂稀释，从而完成两个梯度间的平稳过渡。
我认为这样做有三个好处：
1 省事。免得在旁边看着小心别让柱子流干。
2 减少产生气泡的危险，特别是梯度比较大时，这招很管用。不过下个梯度要稍微多冲些时间才能平衡。有人说20％的浓度差是比较安全的。用此法，我曾经成功地将20％的甲醇－水溶液直接换到100％的甲醇，而柱子安然无恙。
3 上个梯度溶剂被下个梯度溶剂慢慢稀释，使梯度的变化不致过于激烈，起到缓冲作用，效果有点像线性连续梯度，岂不是很好。

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