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terry890

新虫 (小有名气)

[求助] 梯度过柱洗脱

梯度过柱洗脱,如果梯度变化过大会有什么影响?是有气泡吗?
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wxs501

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


karl2100(金币+1): 谢谢回复! 2011-07-05 21:10:57
如果梯度变化过大,那么极性变化就很大,下一个极性的成分会分不开,一起下来。
3楼2011-07-05 17:52:35
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查看全部 16 个回答

豆哥

主管区长 (职业作家)

制粒能手

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


novus(金币+1, EPI+1): 说的不错! 2011-07-05 20:06:46
换梯度时,要特意留一些上一梯度的溶剂在柱子上端。将下一个梯度的溶剂装在分液漏斗中(漏斗上端密闭,下端打开),放在柱子上面,这样柱子下端流出一滴,分液漏斗就会补充一滴,既可以控制柱子中溶剂的高度不变,从而使柱流速稳定;又可以使分液漏斗中流出的每一滴溶剂都被下面的溶剂稀释,从而完成两个梯度间的平稳过渡。
我认为这样做有三个好处:
1 省事。免得在旁边看着小心别让柱子流干。
2 减少产生气泡的危险,特别是梯度比较大时,这招很管用。不过下个梯度要稍微多冲些时间才能平衡。有人说20%的浓度差是比较安全的。用此法,我曾经成功地将20%的甲醇-水溶液直接换到100%的甲醇,而柱子安然无恙。
3 上个梯度溶剂被下个梯度溶剂慢慢稀释,使梯度的变化不致过于激烈,起到缓冲作用,效果有点像线性连续梯度,岂不是很好。
边学边问,才有学问。
2楼2011-07-05 17:05:33
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引用回帖:
Originally posted by 豆哥 at 2011-07-05 17:05:33:
换梯度时,要特意留一些上一梯度的溶剂在柱子上端。将下一个梯度的溶剂装在分液漏斗中(漏斗上端密闭,下端打开),放在柱子上面,这样柱子下端流出一滴,分液漏斗就会补充一滴,既可以控制柱子中溶剂的高度不变, ...

4楼2011-07-05 20:07:33
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james_yy

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


karl2100(金币+1): 谢谢参与讨论! 2011-07-05 21:11:50
梯度过大会使后面的成分一起洗脱下来,一般极性溶剂的比例增加在5-10%,每次洗脱3-5个柱体积。
5楼2011-07-05 20:52:28
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