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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 近期实验小霉...小霉总结
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churchill87426

木虫 (正式写手)

[交流] 近期实验小霉...小霉总结 已有9人参与

1、要做一个酶的inhibitor screening实验，买的Sigma酶网站上标的5000+RMB 50mg，结果送来只有50ug, 后联系Sigma，被告知网站错了...严重延误俺的实验进度。该实验一系列所购试剂价值1W左右，最后全部退货。



2、国产试剂不可信，以前用康为做RT-PCR的试剂盒，后来换了个批号的，同牌子的，无法重现实验。排除各个原因最终发现是试剂盒的问题。最后换Takara RT -PCR试剂盒，1次即搞定。耽误约1个月的时间



3、在鼎国合成引物，PCR，TA克隆，测序发现在引物区就少了一个A碱基，但又不能肯定是引物的错。因为PCR过程Taq polymerase在每次循环中产生的移码突变率为1/30000，碱基替换率为1/8000，但这个突变发生在引物区的概率应该会更低...Hence, 随不敢说肯定是引物的错，但这个概率应该和[1-中彩票概率]差不多了。PS：有兴趣的理性派可以算一下这个概率...
俺又新合成了引物，希望下周赶进度，move move!!!



再次噩耗 :等了一天引物，下午供应商来了告诉我忘带了...伤不起啊伤不起...最近肿么那么被啊......



Summary

实验设计很重要，Hard working也很重要，但高质量的试剂，试剂供应商更重要！！！


BTW 俺不是给厂家打广告的...

[ Last edited by churchill87426 on 2011-7-4 at 16:40 ]
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1楼 2011-07-03 09:20:02
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cdl007

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): 国货确实让人无语 2011-07-03 10:48:39
加油，

国货是让人硬不起来
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2楼2011-07-03 09:22:21
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
祝福一下
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海纳百川止于至善
3楼2011-07-03 18:13:39
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churchill87426

木虫 (正式写手)
再次噩耗 :等了一天引物，下午供应商来了告诉我忘带了...伤不起啊伤不起...最近肿么那么被啊......
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4楼2011-07-04 16:39:35
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w.king124

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我有个同学，在Takara合成的OPC纯化引物，做扩增，连接，转化，测序，结果引物合错了；改为PAGE级别的，做扩增，连接，转化，测序，结果引物又合错了，
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5楼2011-07-05 13:12:00
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jeavy2008

捐助贵宾 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
试剂是很重要，我用百泰克的taq酶 做出假阳性了，测序一看大肠杆菌里的，直接让人无语。
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6楼2011-07-05 13:16:30
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skystull

新虫 (著名写手)
加油了，胜利在望
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超越超越超越
7楼2011-07-05 14:11:35
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sfb1020

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
是不是做实验必须经历这样的过程啊，找到同病相怜的人自己的心里安慰了一些
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8楼2011-07-05 14:31:06
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churchill87426

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by w.king124 at 2011-07-05 13:12:00:
我有个同学，在Takara合成的OPC纯化引物，做扩增，连接，转化，测序，结果引物合错了；改为PAGE级别的，做扩增，连接，转化，测序，结果引物又合错了，

囧，我本来还想改Takara合成呢，是单子上写对，给货不对么？
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9楼2011-07-05 16:50:37
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w.king124

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by churchill87426 at 2011-07-05 16:50:37:
囧，我本来还想改Takara合成呢，是单子上写对，给货不对么？

就是合成合错了，多了几个碱基，结果移码了，导致表达产物也不对，耽误了也有两个月吧
ps 谁知道Takara还做这样的事情，协商解决的结果就是免费再合一次
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10楼2011-07-07 14:25:41
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