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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 最近各种倒霉~
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shenxing325

铜虫 (小有名气)

[求助] 最近各种倒霉~

最近不知道怎么了，做了几次转化，第一次是菌落PCR有条带，但是摇菌摇不起来，我分析可能是卫星菌落带有假阳性；第二次是菌落PCR有条带，摇菌（有抗性的）摇的起来，提质粒也提得到，但是酶切鉴定只有空质粒一条带，好吧，可能还是假阳性；第三次就更悲催了，菌落PCR有条带，摇菌提质粒也没得问题，酶切鉴定结果也不错，然后保菌。结果这个保好的菌在我想提质粒时，就时而提得到质粒，时而提不到，然后提到的质粒大小应该是连上目的条带的，但是酶切就没有了。。。。各位帮我分析下，是怎么回事，我做分子克隆的实验也好一段时间了，技术上应该没有问题，难道是鬼上身。。。
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1楼 2011-10-31 15:12:13
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shenxing325

铜虫 (小有名气)
快做汇报了，心情急切的很，各位帮帮忙，我自己先顶一下
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2楼2011-10-31 15:14:46
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xiaohaozi9876

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2011-10-31 18:27:05
shenxing325(金币+2): 2011-11-01 15:02:16
前2种情况属于正常的
第3种感觉你在挑取的时候有contamination
建议把这个clony重新streaking，挑出正确的一个
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Onceinamoment,wethinkoneselfgrowup,oneday,wefinallyfound...
3楼2011-10-31 15:25:22
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shenxing325

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaohaozi9876 at 2011-10-31 15:25:22:
前2种情况属于正常的
第3种感觉你在挑取的时候有contamination
建议把这个clony重新streaking，挑出正确的一个

谢谢喔~~我试试看吧，那最近这种情况比以前出现的都频繁，是不是说明我的抗生素有点问题呢？感觉买来的时候看起来有点假
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4楼2011-10-31 16:08:49
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xiemin217

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你的三中情况我都见过，原因很大可能是有杂菌，建议换新感受态，重做，这是最便捷的了。
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5楼2011-11-01 10:10:01
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jingdejun

铁杆木虫 (小有名气)
我也是转化出现各种问题啊。
两个月了，实验毫无进展。
看来我们可以多交流啊。
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6楼2011-11-01 12:20:32
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shenxing325

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xiemin217 at 2011-11-01 10:10:01:
你的三中情况我都见过，原因很大可能是有杂菌，建议换新感受态，重做，这是最便捷的了。

感受态应该没什么问题，一批做的都做了很多平板了，以往都很好，我怀疑是抗生素有问题。万恶的销售啊，做个实验容易么，总卖我假药
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7楼2011-11-01 15:01:10
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shenxing325

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jingdejun at 2011-11-01 12:20:32:
我也是转化出现各种问题啊。
两个月了，实验毫无进展。
看来我们可以多交流啊。

做分子的就是要习惯打击。。。与君共勉
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8楼2011-11-01 15:01:54
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xiemin217

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by shenxing325 at 2011-11-01 15:01:10:
感受态应该没什么问题，一批做的都做了很多平板了，以往都很好，我怀疑是抗生素有问题。万恶的销售啊，做个实验容易么，总卖我假药

你可能误解了我的意思，我的意思说重新做一次，包括重新做所有的东西，我记得有大牛是这样说过的，我个人的经验觉得这说的是对的，你要是不停的在找出什么原因，还不如重新做一次。
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9楼2011-11-01 15:44:34
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