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shenxing325

铜虫 (小有名气)

[求助] 最近各种倒霉~

最近不知道怎么了,做了几次转化,第一次是菌落PCR有条带,但是摇菌摇不起来,我分析可能是卫星菌落带有假阳性;第二次是菌落PCR有条带,摇菌(有抗性的)摇的起来,提质粒也提得到,但是酶切鉴定只有空质粒一条带,好吧,可能还是假阳性;第三次就更悲催了,菌落PCR有条带,摇菌提质粒也没得问题,酶切鉴定结果也不错,然后保菌。结果这个保好的菌在我想提质粒时,就时而提得到质粒,时而提不到,然后提到的质粒大小应该是连上目的条带的,但是酶切就没有了。。。。各位帮我分析下,是怎么回事,我做分子克隆的实验也好一段时间了,技术上应该没有问题,难道是鬼上身。。。
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shenxing325

铜虫 (小有名气)

快做汇报了,心情急切的很,各位帮帮忙,我自己先顶一下
2楼2011-10-31 15:14:46
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xiaohaozi9876

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流! 2011-10-31 18:27:05
shenxing325(金币+2): 2011-11-01 15:02:16
前2种情况属于正常的
第3种感觉你在挑取的时候有contamination
建议把这个clony重新streaking,挑出正确的一个
Onceinamoment,wethinkoneselfgrowup,oneday,wefinallyfound...
3楼2011-10-31 15:25:22
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shenxing325

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaohaozi9876 at 2011-10-31 15:25:22:
前2种情况属于正常的
第3种感觉你在挑取的时候有contamination
建议把这个clony重新streaking,挑出正确的一个

谢谢喔~~我试试看吧,那最近这种情况比以前出现的都频繁,是不是说明我的抗生素有点问题呢?感觉买来的时候看起来有点假
4楼2011-10-31 16:08:49
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xiemin217

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你的三中情况我都见过,原因很大可能是有杂菌,建议换新感受态,重做,这是最便捷的了。
5楼2011-11-01 10:10:01
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jingdejun

铁杆木虫 (小有名气)

我也是转化出现各种问题啊。
两个月了,实验毫无进展。
看来我们可以多交流啊。
6楼2011-11-01 12:20:32
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shenxing325

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by xiemin217 at 2011-11-01 10:10:01:
你的三中情况我都见过,原因很大可能是有杂菌,建议换新感受态,重做,这是最便捷的了。

感受态应该没什么问题,一批做的都做了很多平板了,以往都很好,我怀疑是抗生素有问题。万恶的销售啊,做个实验容易么,总卖我假药
7楼2011-11-01 15:01:10
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shenxing325

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by jingdejun at 2011-11-01 12:20:32:
我也是转化出现各种问题啊。
两个月了,实验毫无进展。
看来我们可以多交流啊。

做分子的就是要习惯打击。。。与君共勉
8楼2011-11-01 15:01:54
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xiemin217

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by shenxing325 at 2011-11-01 15:01:10:
感受态应该没什么问题,一批做的都做了很多平板了,以往都很好,我怀疑是抗生素有问题。万恶的销售啊,做个实验容易么,总卖我假药

你可能误解了我的意思,我的意思说重新做一次,包括重新做所有的东西,我记得有大牛是这样说过的,我个人的经验觉得这说的是对的,你要是不停的在找出什么原因,还不如重新做一次。
9楼2011-11-01 15:44:34
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