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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 求助细胞周期检测前关于细胞收集等的疑惑
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xiajing_acm

新虫 (小有名气)

[求助] 求助细胞周期检测前关于细胞收集等的疑惑

各位大侠：
    你们好！小弟要做细胞周期检测，有些细节问题不太明确，请帮忙指导下：
1、在细胞收集的时候，是不是连同孔板里的细胞培养液一起收集，再加胰酶消化细胞然后在将它们收集到一起呢？经过药物作用以后，细胞肯定有部分细胞坏死而漂浮起来，不知道这样的细胞是不是也要收集呢？
2、细胞收集以后，固定时，是将细胞滴加到7预冷70%乙醇里面比较好呢？还是先用PBS混悬细胞然后加乙醇到所需浓度呢？
3、细胞固定过夜后细胞沉淀是不是需要多用PBS清洗几遍才能吹散而均匀啊？
    谢谢各位的指导，恳请大家指点！
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1楼2011-06-30 09:03:30
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love_mzy

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

xiajing_acm(金币+5): 2011-08-10 13:59:55
1 我做时是连同培养液一起收集的，胰酶终止消化时用此培养液终止即可。不收集的 话势必会对实验结果真实性有较大影响
2 细胞固定时，用300微升PBS将细胞重悬，缓缓滴加到700微升遇冷的无水乙醇中。此方法可保证乙醇的比例
3 PBS洗得次数按照试剂盒说明书进行即可，细胞是否均匀悬浮在乙醇中与PBS洗得次数无关，与你收集的细胞数、悬浮溶液的量、是否充分震摇有关
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3楼2011-08-05 10:01:50
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tube1031aaa

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
karl2100(金币+1): 谢谢！ 2011-07-02 00:18:37
xiajing_acm(金币+5): 谢谢！希望多交流！ 2011-07-12 16:58:48
引用回帖:
Originally posted by xiajing_acm at 2011-06-30 09:03:30:
各位大侠：
    你们好！小弟要做细胞周期检测，有些细节问题不太明确，请帮忙指导下：
1、在细胞收集的时候，是不是连同孔板里的细胞培养液一起收集，再加胰酶消化细胞然后在将它们收集到一起呢？经过药物作用 ...

1、最好连同培养液一起收集
2、收细胞后，剧烈振摇细胞团10秒，然后边振摇边一滴滴加入预冷乙醇1ml
3、PBS洗一遍就行了，细胞很容易吹散啊
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-07-01 09:02:21
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