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xiajing_acm

新虫 (小有名气)

[求助] 求助细胞周期检测前关于细胞收集等的疑惑

各位大侠:
    你们好!小弟要做细胞周期检测,有些细节问题不太明确,请帮忙指导下:
1、在细胞收集的时候,是不是连同孔板里的细胞培养液一起收集,再加胰酶消化细胞然后在将它们收集到一起呢?经过药物作用以后,细胞肯定有部分细胞坏死而漂浮起来,不知道这样的细胞是不是也要收集呢?
2、细胞收集以后,固定时,是将细胞滴加到7预冷70%乙醇里面比较好呢?还是先用PBS混悬细胞然后加乙醇到所需浓度呢?
3、细胞固定过夜后细胞沉淀是不是需要多用PBS清洗几遍才能吹散而均匀啊?
    谢谢各位的指导,恳请大家指点!
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tube1031aaa

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


karl2100(金币+1): 谢谢! 2011-07-02 00:18:37
xiajing_acm(金币+5): 谢谢!希望多交流! 2011-07-12 16:58:48
引用回帖:
Originally posted by xiajing_acm at 2011-06-30 09:03:30:
各位大侠:
    你们好!小弟要做细胞周期检测,有些细节问题不太明确,请帮忙指导下:
1、在细胞收集的时候,是不是连同孔板里的细胞培养液一起收集,再加胰酶消化细胞然后在将它们收集到一起呢?经过药物作用 ...

1、最好连同培养液一起收集
2、收细胞后,剧烈振摇细胞团10秒,然后边振摇边一滴滴加入预冷乙醇1ml
3、PBS洗一遍就行了,细胞很容易吹散啊
2楼2011-07-01 09:02:21
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love_mzy

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

xiajing_acm(金币+5): 2011-08-10 13:59:55
1 我做时是连同培养液一起收集的,胰酶终止消化时用此培养液终止即可。不收集的 话势必会对实验结果真实性有较大影响
2 细胞固定时,用300微升PBS将细胞重悬,缓缓滴加到700微升遇冷的无水乙醇中。此方法可保证乙醇的比例
3 PBS洗得次数按照试剂盒说明书进行即可,细胞是否均匀悬浮在乙醇中与PBS洗得次数无关,与你收集的细胞数、悬浮溶液的量、是否充分震摇有关
3楼2011-08-05 10:01:50
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