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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 鼠尾胶原的灭菌
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
看天(金币+5): 鼓励热心回答 2011-07-09 14:54:25
引用回帖:
Originally posted by 纯渴 at 2011-06-28 17:20:06:
各位虫友，我要做大鼠原代肝的培养，需要用到鼠尾胶原，在配置中把冰醋酸的浓度弄成的0.5%（原本应该是0.1%）不知道有没有影响，还有是冰醋酸没有灭过菌的，整个操作在外面火焰旁操作的，不知道这样的操作会不会染 ...

1.鼠尾胶原提取前得鼠尾要用75的酒精浸泡15-30分钟；
2.0.1%冰醋酸是要提前配置好，过滤除菌的，光在火焰旁操作估计不可靠；3.0.5%估计到不会影响到胶原抽提产量，但是对胶原的使用也许会产生影响，具体的我也不清楚，好像是太酸了不容易凝固，得接近中性才能凝固，反正大家都用0.1%的肯定是有它的道理，所以最好用0.1%的吧；
4.配置好的胶原既不能过滤除菌也不能高压灭菌，切记。要是担心污染可于生物安全柜内紫外照射消毒，照射30分钟-过夜吧；
4.铺板浓度是大约6-10ug/cm^2，其实不用管那么多，直接让胶铺满就可以的了
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
11楼2011-07-07 15:23:06
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xxzcf

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

纯渴(金币+3): 2011-07-09 09:52:45
自行提纯，可以讲鼠尾浸泡在灭菌溶液中，甚至70%酒精擦拭。

胶原蛋白加热变性。

可以用Sodium azide，之后透析，不过醋酸也出来了，可以再次添加至0.1%。

紫外灭菌1.仅可以用于表面灭菌，不能深入  2.不能保证100%灭菌，而且很多细菌可以活。 3. 紫外灯的使用寿命在5000小时，经常忘记还要换灯，所以杀菌效果马马虎虎。4.由于穿透力，对于真菌，病毒什么的没什么用。
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12楼2011-07-08 22:59:23
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xxzcf

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

纯渴(金币+2): 2011-07-09 09:52:56
引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-07-07 08:23:06:
1.鼠尾胶原提取前得鼠尾要用75的酒精浸泡15-30分钟；
2.0.1%冰醋酸是要提前配置好，过滤除菌的，光在火焰旁操作估计不可靠；3.0.5%估计到不会影响到胶原抽提产量，但是对胶原的使用也许会产生影响，具体的我也 ...

传统上使用0.1-0.5%醋酸，柠檬酸甚至盐酸提取，但是酸性太强，在提取过程中，会造成酸解蛋白质。
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13楼2011-07-08 23:02:30
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whpyykl

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by xxzcf at 2011-07-08 23:02:30:
传统上使用0.1-0.5%醋酸，柠檬酸甚至盐酸提取，但是酸性太强，在提取过程中，会造成酸解蛋白质。

你好，0.1%的HAc是什么意思呢？
是不是指，在100mL添加醋酸后的溶液中含有0.1g醋酸呢？对这个概念一直不是很理解，希望得到指点，谢谢。
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14楼2012-03-07 11:21:26
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xxzcf

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by whpyykl at 2012-03-07 04:21:26:
你好，0.1%的HAc是什么意思呢？
是不是指，在100mL添加醋酸后的溶液中含有0.1g醋酸呢？对这个概念一直不是很理解，希望得到指点，谢谢。

如果你的醋酸是100%的冰醋酸，那么是的。也可以算摩尔浓度，也有很多文献写0.1-0.5M的醋酸溶液，那么其实差不多是0.3%-1.5%的1样子，其实溶解起来就是速度的问题，pH差不多在2.8-3.5左右，破坏氢键之类的作用，将胶原的纤维分开，但是酸水解还是很明显的，所以时间越长，酸浓度越高，水解越明显，明胶成分越多。
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15楼2012-03-07 15:42:53
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