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纯渴

金虫 (正式写手)

[求助] 鼠尾胶原的灭菌

各位虫友,我要做大鼠原代肝的培养,需要用到鼠尾胶原,在配置中把冰醋酸的浓度弄成的0.5%(原本应该是0.1%)不知道有没有影响,还有是冰醋酸没有灭过菌的,整个操作在外面火焰旁操作的,不知道这样的操作会不会染菌
   还有就是离心后的胶原到底能不能高压的
   有一种想法,把离心后的上清冷冻,在真空干燥成粉末,紫外灭菌——这方法可行不(主要考虑是否会染菌)
   最后想问下,大家铺板时胶原的浓度一般多少的(按书上配法原液的浓度是20mg/ml)
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xxzcf

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

纯渴(金币+3): 2011-07-09 09:52:45
自行提纯,可以讲鼠尾浸泡在灭菌溶液中,甚至70%酒精擦拭。

胶原蛋白加热变性。

可以用Sodium azide,之后透析,不过醋酸也出来了,可以再次添加至0.1%。

紫外灭菌1.仅可以用于表面灭菌,不能深入  2.不能保证100%灭菌,而且很多细菌可以活。 3. 紫外灯的使用寿命在5000小时,经常忘记还要换灯,所以杀菌效果马马虎虎。4.由于穿透力,对于真菌,病毒什么的没什么用。
12楼2011-07-08 22:59:23
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luzeyan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以抽滤,这种方法简便一些
2楼2011-06-28 20:36:51
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纯渴

金虫 (正式写手)

这么抽滤呢,滤纸都要灭菌吗,而且这样的装置都是在外面的,不是会染菌吗,如果可以做,请教下具体步骤
3楼2011-06-29 11:10:16
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大漠挥刀

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+10): 处女帖,鼓励交流 2011-06-29 16:58:30
silicare(EPI+1): 2011-06-29 16:58:45
由于胶原粘度较大,难以滤过除菌。
在醋酸中处理完,4000转离心30min 吸取上清,经67.55KPa(115.6度)高压灭菌10min后分装,-20保存。
4楼2011-06-29 13:51:12
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