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纯渴

金虫 (正式写手)

[求助] 鼠尾胶原的灭菌

各位虫友,我要做大鼠原代肝的培养,需要用到鼠尾胶原,在配置中把冰醋酸的浓度弄成的0.5%(原本应该是0.1%)不知道有没有影响,还有是冰醋酸没有灭过菌的,整个操作在外面火焰旁操作的,不知道这样的操作会不会染菌
   还有就是离心后的胶原到底能不能高压的
   有一种想法,把离心后的上清冷冻,在真空干燥成粉末,紫外灭菌——这方法可行不(主要考虑是否会染菌)
   最后想问下,大家铺板时胶原的浓度一般多少的(按书上配法原液的浓度是20mg/ml)
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天津weikai

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+7, EPI+1): 鼓励新虫发帖交流。 2011-07-05 22:39:38
纯渴(金币+7): 谢谢 2011-07-09 09:54:28
胶原蛋白不能高压灭菌,本身胶原蛋白就是对温度敏感的蛋白,60°左右就会变性的,一般都尽量不在室温操作。过滤除菌也不行,胶原白白分子量还是比较大的,过滤不过去。如果你现在是液体,最好使用透析的方法除菌。就是用无菌的醋酸溶液反复的透析3-5次,因该就没问题了。我就是这样做的。另外还有一个方法,就是冷冻干燥后用无菌的醋酸溶液溶解即可,但是必须保证冷冻整个过程是无菌操作的。
9楼2011-07-05 22:12:07
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普通回帖

luzeyan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以抽滤,这种方法简便一些
2楼2011-06-28 20:36:51
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纯渴

金虫 (正式写手)

这么抽滤呢,滤纸都要灭菌吗,而且这样的装置都是在外面的,不是会染菌吗,如果可以做,请教下具体步骤
3楼2011-06-29 11:10:16
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大漠挥刀

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+10): 处女帖,鼓励交流 2011-06-29 16:58:30
silicare(EPI+1): 2011-06-29 16:58:45
由于胶原粘度较大,难以滤过除菌。
在醋酸中处理完,4000转离心30min 吸取上清,经67.55KPa(115.6度)高压灭菌10min后分装,-20保存。
4楼2011-06-29 13:51:12
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纯渴

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 大漠挥刀 at 2011-06-29 13:51:12:
由于胶原粘度较大,难以滤过除菌。
在醋酸中处理完,4000转离心30min 吸取上清,经67.55KPa(115.6度)高压灭菌10min后分装,-20保存。

确定可以高压吗,我高压过一次,温度是121,之后感觉胶原就不能用了
5楼2011-06-30 11:30:52
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lzeyan

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

纯渴(金币+3): 谢谢 2011-07-09 09:54:12
引用回帖:
Originally posted by 纯渴 at 2011-06-29 11:10:16:
这么抽滤呢,滤纸都要灭菌吗,而且这样的装置都是在外面的,不是会染菌吗,如果可以做,请教下具体步骤

将胶原用醋酸稀释后,在超净台内,用一次性注射器吸取胶原溶液至一次性滤器中抽滤,
一次性滤器公司有卖的。
6楼2011-07-03 18:20:50
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lzeyan

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by 纯渴 at 2011-06-29 11:10:16:
这么抽滤呢,滤纸都要灭菌吗,而且这样的装置都是在外面的,不是会染菌吗,如果可以做,请教下具体步骤

将胶原用醋酸稀释后,在超净台内,用一次性注射器吸取胶原溶液至一次性滤器中抽滤,
一次性滤器公司有卖的。
7楼2011-07-03 18:21:08
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纯渴

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by lzeyan at 2011-07-03 18:21:08:
将胶原用醋酸稀释后,在超净台内,用一次性注射器吸取胶原溶液至一次性滤器中抽滤,
一次性滤器公司有卖的。

请问还有其他的方法吗
8楼2011-07-05 18:08:31
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纯渴

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 天津weikai at 2011-07-05 22:12:07:
胶原蛋白不能高压灭菌,本身胶原蛋白就是对温度敏感的蛋白,60°左右就会变性的,一般都尽量不在室温操作。过滤除菌也不行,胶原白白分子量还是比较大的,过滤不过去。如果你现在是液体,最好使用透析的方法除菌。 ...

能具体讲讲透析的步骤吗,我们这的冷冻干燥机好像不能干燥有机溶剂的(醋酸溶液),所以想看看用透析的行不行,但不知道具体怎么操作
10楼2011-07-07 13:45:56
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