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纯渴

金虫 (正式写手)

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虫号: 1309081
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专业: 细胞生长与分裂

[求助] 鼠尾胶原的灭菌

各位虫友，我要做大鼠原代肝的培养，需要用到鼠尾胶原，在配置中把冰醋酸的浓度弄成的0.5%（原本应该是0.1%）不知道有没有影响，还有是冰醋酸没有灭过菌的，整个操作在外面火焰旁操作的，不知道这样的操作会不会染菌
还有就是离心后的胶原到底能不能高压的
有一种想法，把离心后的上清冷冻，在真空干燥成粉末，紫外灭菌——这方法可行不（主要考虑是否会染菌）
最后想问下，大家铺板时胶原的浓度一般多少的（按书上配法原液的浓度是20mg/ml)

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1楼2011-06-28 17:20:06

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天津weikai

新虫 (初入文坛)

BioEPI: 1
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专业: 细胞生物学研究中的新方法

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+7, EPI+1): 鼓励新虫发帖交流。 2011-07-05 22:39:38
纯渴(金币+7): 谢谢 2011-07-09 09:54:28

胶原蛋白不能高压灭菌，本身胶原蛋白就是对温度敏感的蛋白，60°左右就会变性的，一般都尽量不在室温操作。过滤除菌也不行，胶原白白分子量还是比较大的，过滤不过去。如果你现在是液体，最好使用透析的方法除菌。就是用无菌的醋酸溶液反复的透析3-5次，因该就没问题了。我就是这样做的。另外还有一个方法，就是冷冻干燥后用无菌的醋酸溶液溶解即可，但是必须保证冷冻整个过程是无菌操作的。