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鼠尾胶原的灭菌
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各位虫友，我要做大鼠原代肝的培养，需要用到鼠尾胶原，在配置中把冰醋酸的浓度弄成的0.5%（原本应该是0.1%）不知道有没有影响，还有是冰醋酸没有灭过菌的，整个操作在外面火焰旁操作的，不知道这样的操作会不会染菌 还有就是离心后的胶原到底能不能高压的 有一种想法，把离心后的上清冷冻，在真空干燥成粉末，紫外灭菌——这方法可行不（主要考虑是否会染菌） 最后想问下，大家铺板时胶原的浓度一般多少的（按书上配法原液的浓度是20mg/ml) |
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jhu132llh
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大洪
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
看天(金币+5): 鼓励热心回答 2011-07-09 14:54:25
看天(金币+5): 鼓励热心回答 2011-07-09 14:54:25
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1.鼠尾胶原提取前得鼠尾要用75的酒精浸泡15-30分钟； 2.0.1%冰醋酸是要提前配置好，过滤除菌的，光在火焰旁操作估计不可靠；3.0.5%估计到不会影响到胶原抽提产量，但是对胶原的使用也许会产生影响，具体的我也不清楚，好像是太酸了不容易凝固，得接近中性才能凝固，反正大家都用0.1%的肯定是有它的道理，所以最好用0.1%的吧； 4.配置好的胶原既不能过滤除菌也不能高压灭菌，切记。要是担心污染可于生物安全柜内紫外照射消毒，照射30分钟-过夜吧； 4.铺板浓度是大约6-10ug/cm^2，其实不用管那么多，直接让胶铺满就可以的了 |
11楼2011-07-07 15:23:06
luzeyan
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2楼2011-06-28 20:36:51
3楼2011-06-29 11:10:16
4楼2011-06-29 13:51:12