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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » gst标签，蛋白纯化
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hooroberts

新虫 (小有名气)

[求助] gst标签，蛋白纯化

大家看看我这目的蛋白，在上清中纯化有希望吗，gst标签的，整了几次没出来，放好久了，如果不行的话是不是纯化包涵体也行，gst的是不是变性后腰先复性再纯化，如果复性的话怎么复性？做酶活的，对量不要求多大。
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1楼 2011-06-27 22:55:24
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hooroberts

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by toxicpeach at 2011-07-01 12:31:33:
那你用包涵体做一次杂交嘛，至少包涵体洗洗就比较纯了。不做杂交还是不放心啊，我师弟就是怎么纯化也没有目的条带才想到做杂交的，结果果然不是，也不排除可溶的那点和包涵体根本就不是一个东西，但是一般有包涵体 ...

表达的应该确实是目的蛋白，因为又一次我用盐酸胍溶解包涵体没有复性做了次纯化elution buffer 中有一条淡淡的带
培养基我一直用LB，基础培养基有更好吗
去垢剂增溶的话我都是在超声波破碎之前用np40增容的
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22楼2011-07-01 14:03:24
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693137546

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

建议楼主不要做包涵体呀
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大风气息云飞扬
2楼2011-06-27 23:08:46
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hooroberts

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 693137546 at 2011-06-27 23:08:46:
建议楼主不要做包涵体呀

不到必要时我也不想
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3楼2011-06-28 21:48:29
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落明逐暗

金虫 (正式写手)

好吃嘴班班长

【答案】应助回帖

hooroberts(金币+2): 试过，16度，0.15mmol，24小时，没效果。 2011-06-29 23:51:13
建议楼主降低发酵温度和转速，延长发酵时间，这样应该会提高在上清中的表达量。30℃，200rpm，6-7小时应该不错。之后再进行纯化就能有合适的上样量。不然上样量太低也没有好的纯化效果。光凭图的话，真的量太少了。
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天涯静处无征战，兵气销为日月光。
4楼2011-06-29 10:05:54
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查看全部 26 个回答
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