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[交流]
硫酸铵沉淀后透析，里面的沉淀是什么？
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| 我觉得是透析后，铵根离子的减少，使透析袋里溶液的pH改变，使蛋白发生沉淀，但我觉得，还是应该保留的，有些人说要离心，把沉淀去掉，请问大家， 为什么呢？ |
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冼亮淀粉酶
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nayitian_nan(金币+1):谢谢参与
nayitian_nan(金币+3): 谢谢，专家顾问~就是不一样，其实沉淀蛋白方法是上届师兄的，还申请了专利，一直没有怀疑，他说80%我就80%了，但是，我的蛋白是碱性的，不知道为什么他用酸溶液提取？联系不上他， 2011-06-27 08:50:09
silicare(金币+3, EPI+1): 2011-06-27 12:10:50
nayitian_nan(金币+1):谢谢参与
nayitian_nan(金币+3): 谢谢，专家顾问~就是不一样，其实沉淀蛋白方法是上届师兄的，还申请了专利，一直没有怀疑，他说80%我就80%了，但是，我的蛋白是碱性的，不知道为什么他用酸溶液提取？联系不上他， 2011-06-27 08:50:09
silicare(金币+3, EPI+1): 2011-06-27 12:10:50
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硫酸铵沉淀的时候应该要注意pH值的变化，就我的实验来说，一株产淀粉酶曲霉固态发酵之后用超纯水浸泡离心，得到含有酶的上清液的pH值为6.5，但是淀粉酶能耐受pH4.5，为了去除更多杂质蛋白质，我把硫酸铵浓度调节到2摩尔每升的同时会控制pH值为4.5，4度过夜之后离心取上清液再调节到pH值7.0，4度放置，离心，又去除一部分杂质蛋白质，上清液直接用pH7.0的疏水层析系统来纯化。 一个纤维素酶的纯化我也用类似的方法，只不过第一步是用4.0。 硫酸铵是酸式盐，2M时pH值约为5，4M时更低，用来沉淀蛋白质的时候情况就更复杂了，所以最好知道自己需要的蛋白质的耐受情况，不要搞死了。 透析之前要选用一个不影响自己想要的蛋白质的pH值，硫酸铵沉淀和透析都要保持一致，才能使损失减少。透析时候产生的沉淀不知道是不是你想要的蛋白质，不过下次做最好谨慎一点，做我说过的预备实验。 |
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