应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 拟南芥原生质分离实验～～
261/3返回列表123下一页
查看: 2802  |  回复: 25
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看

shaquila

金虫 (正式写手)

[求助] 拟南芥原生质分离实验～～

配好酶溶液后叶片放进去抽真空40分钟，室温放置5小时，叶片还是没有溶解，原生质基本没啥释放，叶片大小为2-3mm（因为叶龄较老，不好切）

配方：
酶溶液 (10ml):
甘露醇0.4 M, KCl        20mM, MES(0.5M,pH5.7) 20mM, 纤维素酶R10 150mg, 离析酶R10 40mg       
在  55℃加入酶溶液10分钟 (失活蛋白酶并增强酶的溶解性)用之前冷却至室温

1M CaCl2        0.1ml        10mM
β-巯基乙醇        4μL        5mM
10% FBS (用BSA代替了)        0.1ml        0.1%
过0.45 μm滤器（用0.22代替）
酶溶液要是亮棕色并且澄清
我的酶液是基本无色，纤维素酶R10这个东东是黄色粉末，但是溶解后颜色没有那么深，买的是Cellulase from Aspergillus niger（sigma），离析酶R10是Pectinase from Aspergillus niger（sigma），不知道是不是这两个出问题？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

shaquila

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-22 19:51:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

shaquila

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by syn1985 at 2011-06-24 14:50:34:
我当时用的酶是我们老师买的 就是从国内一家生物公司买的 应该是sigma的 酶的名字就和那篇文献里面写的一样的

我发现里面推荐的酶是yakult的日本公司，但是在国内好像很难买到～～
sigma的酶好像不大好用，能帮我确认下吗？
如果是yakult的，要和哪个公司联系，谢谢啦
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-06-28 11:17:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
难得在本版见到玩字体的，帮顶下
赞一下 回复此楼
2楼2011-06-22 21:48:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuzuobin125

铜虫 (小有名气)
没有做过这方面的实验，等待楼下高手出招。
赞一下 回复此楼
3楼2011-06-23 00:44:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwbk

木虫 (正式写手)
感兴趣~对这方面没经验。期望大牛来指导一下~
赞一下 回复此楼
4楼2011-06-23 00:59:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tiaotiger

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流！崩溃酶这名字很牛逼的样子……孤陋寡闻了，待我google看看，呵呵～ 2011-06-24 10:08:18
shaquila(金币+10): 我看别人硕士论文有用4种酶比较，好像还有一中半纤维酶，比较下可以互相配合，谢谢呀～～但是论文里面没有关于产品的描述，这点不利于后面的人重复～～ 2011-06-24 14:38:20
可以试用下崩溃酶，我用来制备丝状真菌原生质体，效果很好！
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-06-24 10:02:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syn1985

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good！ 2011-06-24 10:44:34
shaquila(金币+10): 谢谢 2011-06-24 14:36:09
引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-06-22 19:51:01:
配好酶溶液后叶片放进去抽真空40分钟，室温放置5小时，叶片还是没有溶解，原生质基本没啥释放，叶片大小为2-3mm（因为叶龄较老，不好切）

配方：
酶溶液 (10ml):
甘露醇0.4 M, KCl        20mM, MES(0. ...

这个实验我1年前做过，首先40d龄的叶片细胞状态最好，如果太老了就算你分离出来了原生质体你也会发现叶绿素分布已经开始不均匀了，这对后面的质粒转化是非常不利的。
我没记错的话nature上有一篇文章详细讲解了如何做这个，好好看看文献吧
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-06-24 10:41:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)
谢谢楼上～～～～～
应该是我买的酶有问题
分别是Pectinase from Aspergillus niger
和Cellulase from Aspergillus niger，但是别人买的是Cellulase from Trichoderma viride和Pectinase from Rhizopus sp.
其中cellulase活性竟然是我的10倍，悲催
pectinase from AN的酶活定义竟然是50度，神马东西嘛。。。
赞一下 回复此楼
7楼2011-06-24 14:35:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)
另外，谁知道国内哪里有卖这两种酶的，到货时间较快的？
赞一下 回复此楼
8楼2011-06-24 14:45:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syn1985

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-06-24 14:45:05:
另外，谁知道国内哪里有卖这两种酶的，到货时间较快的？

我当时用的酶是我们老师买的 就是从国内一家生物公司买的 应该是sigma的 酶的名字就和那篇文献里面写的一样的
赞一下 回复此楼
9楼2011-06-24 14:50:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shaquila 的主题更新
261/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +12 爱看书的可乐 2026-08-26 14/700 2026-08-26 11:49 by coolysnow
[基金申请] 科研孤儿太难了 +21 我4大白菜 2026-08-20 22/1100 2026-08-26 11:29 by nlgza
[基金申请] 系统查不到 +5 董八千 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:29 by panjy.cn
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +22 koalala 2026-08-24 25/1250 2026-08-26 11:14 by dxcharlary
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +4 叶九微 2026-08-26 4/200 2026-08-26 10:52 by xiacongxu
[基金申请] 出来了 +8 trojank 2026-08-26 8/400 2026-08-26 09:00 by gxc
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +24 木水思豆 2026-08-25 27/1350 2026-08-26 08:26 by yanchen918
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 有没有大神帮我看看基金代码 28+4 1234567wang 2026-08-24 10/500 2026-08-25 19:15 by lfy8008
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 19/950 2026-08-25 17:57 by chick875
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭