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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 拟南芥原生质分离实验～～
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syn1985

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good！ 2011-06-24 10:44:34
shaquila(金币+10): 谢谢 2011-06-24 14:36:09
引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-06-22 19:51:01:
配好酶溶液后叶片放进去抽真空40分钟，室温放置5小时，叶片还是没有溶解，原生质基本没啥释放，叶片大小为2-3mm（因为叶龄较老，不好切）

配方：
酶溶液 (10ml):
甘露醇0.4 M, KCl        20mM, MES(0. ...

这个实验我1年前做过，首先40d龄的叶片细胞状态最好，如果太老了就算你分离出来了原生质体你也会发现叶绿素分布已经开始不均匀了，这对后面的质粒转化是非常不利的。
我没记错的话nature上有一篇文章详细讲解了如何做这个，好好看看文献吧
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6楼2011-06-24 10:41:35
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【答案】应助回帖

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西瓜(金币+5, EPI+1): Good 2011-06-28 22:55:25
另我，去年好象有篇plant method上的文章用“三明治”的方法也可以，对于较老的叶子可能更可能，因为其是把下表皮用胶带去掉再酶解的。 我们一般用20天左右的叶子酶解2h左右还挺多的。
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2011-06-28 12:58:35
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