24小时热门版块排行榜

返回列表

本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

shaquila

金虫 (正式写手)

MolEPI: 5
应助: 37 (小学生)
金币: 1484.8
散金: 59
红花: 14
帖子: 553
在线: 182.3小时
虫号: 654839
注册: 2008-11-15
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 拟南芥原生质分离实验～～

配好酶溶液后叶片放进去抽真空40分钟，室温放置5小时，叶片还是没有溶解，原生质基本没啥释放，叶片大小为2-3mm（因为叶龄较老，不好切）

配方：
酶溶液 (10ml):
甘露醇0.4 M, KCl 20mM, MES(0.5M,pH5.7) 20mM, 纤维素酶R10 150mg, 离析酶R10 40mg
在 55℃加入酶溶液10分钟 (失活蛋白酶并增强酶的溶解性)用之前冷却至室温

1M CaCl2 0.1ml 10mM
β-巯基乙醇 4μL 5mM
10% FBS (用BSA代替了) 0.1ml 0.1%
过0.45 μm滤器（用0.22代替）
酶溶液要是亮棕色并且澄清
我的酶液是基本无色，纤维素酶R10这个东东是黄色粉末，但是溶解后颜色没有那么深，买的是Cellulase from Aspergillus niger（sigma），离析酶R10是Pectinase from Aspergillus niger（sigma），不知道是不是这两个出问题？

回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

shaquila

» 猜你喜欢

1楼 2011-06-22 19:51:01

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

十比

木虫 (著名写手)

MolEPI: 1
应助: 39 (小学生)
金币: 3209.9
散金: 1125
红花: 5
帖子: 1204
在线: 569小时
虫号: 221737
注册: 2006-03-20
性别: GG
专业: 植物学研究的新技术、新方

最好用yakult的日本公司的酶，北京普博欣公司就有，我们一直在用，挺好的，你
的真空太久了吧，我们有时都不抽的，有也是1分钟就OK，酶解时慢摇可能会好点。
建议看看这个实验室http://genetics.mgh.harvard.edu/sheenweb/main_page.html　几乎全世界做原生质体的方法都来自这里。