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天鸟管理员
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[交流]
巢式PCR特异性扩增
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我采用巢式PCR扩16S rDNA，第一轮模板为泥样总DNA。第一轮采用27F和1492R进行P，有几个条带出现在合适的位置。 (95 °C for 5 min, 40 cycles of 94 °C for 30 s, 55 °C for 30 s and 72 °C for 90 s, and final extension at 72 °C for 10 min, then a pause at 4 °C. 50微升体系：2500 ng BSA, 5 pmol of each primer(0.5 μL), 5 mM dNTPs 4 μL, and 1.25U of Taq DNA polymerase (Takara,Japan)(0.25μL) and 1 μL of template DNA  然后我将那几个有条带的，进行巢式PCR,采用908F-GC和1401R进行，发现很多特异性的条带,该轮体系同上，条件为95 °C for 5 min, 39 cycles of 94 °C for 60 s, 55 °C for 60 s and 72 °C for 90 s, and final extension at 72 °C for 10 min, then a pause at 4 °C.  我打算扩出第二轮的产物进行DGGE分析的 请问大家有什么好意见呀，谢谢 |
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天鸟
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