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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 巢式PCR特异性扩增
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天鸟

木虫 (正式写手)

[交流] 巢式PCR特异性扩增

我采用巢式PCR扩16S rDNA，第一轮模板为泥样总DNA。第一轮采用27F和1492R进行P，有几个条带出现在合适的位置。 (95 °C for 5 min, 40 cycles of 94 °C for 30 s, 55 °C for 30 s and 72 °C for 90 s, and final extension at 72 °C for 10 min, then a pause at 4 °C.
50微升体系：2500 ng BSA, 5 pmol of each primer(0.5 μL), 5 mM dNTPs 4 μL, and 1.25U of Taq DNA polymerase (Takara,Japan)(0.25μL) and 1 μL of template DNA

然后我将那几个有条带的，进行巢式PCR,采用908F-GC和1401R进行，发现很多特异性的条带,该轮体系同上，条件为95 °C for 5 min, 39 cycles of 94 °C for 60 s, 55 °C for 60 s and 72 °C for 90 s, and final extension at 72 °C for 10 min, then a pause at 4 °C.


我打算扩出第二轮的产物进行DGGE分析的
请问大家有什么好意见呀，谢谢
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快乐生活，我快乐
1楼 2011-06-15 09:38:26
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天鸟

木虫 (正式写手)
谁来帮我解释解释呀
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快乐生活，我快乐
2楼2011-06-15 20:37:18
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