| 查看: 13321 | 回复: 75 | ||||||||||
leecius铁杆木虫 (正式写手)
|
[交流]
关于高效液相色谱法基线波动和基线漂移等引发因素的一些小结 已有62人参与
|
|||||||||
|
最近在论坛里发现很多虫友在HPLC试验中经常受到基线波动或基线漂移的困扰，下面就我本人在实验中积累的或从别处了解到的一些经验总结如下，欢迎大家指正。 1.液相系统没有平衡好，柱子里的流动相一直在变化，在检测器里面的吸收就会一直变化，导致基线波动的发生；梯度时如果其实比例的流动相平衡时间过短也会造成基线波动； 2.实验室环境不稳定（比如温度忽高忽低，气流不断变化等），这对于没有柱温箱或只有单向温度变化的HPLC仪器的影响尤其明显；即使有比较好的柱温箱时，也要注意别让空调的出风口一直对照仪器吹，那样基线也可能会波动；此外实验室有电磁干扰时，也有可能会导致此问题的发生； 3.检测器的流通池被污染，造成吸收的不恒定，此时需要清洗流通池； 4.检测器灯能量不足时，吸收会变得不稳定，这时基线一般也不稳定，特别是在低波长处尤为明显； 5.当使用低波长检测时，有时流动相会使用两相或以上的等度，这时混合器的很小的混合比例的误差都会被放大，很有可能会使基线发生波动，这时将流动相按比例混合到一个通道里时，一般都会使情况改善很多； 6.流动相里的有机相的截止波长最好要大于检测波长20nm以上，这一点切记，比如甲醇的截止波长是210nm，乙腈是190nm。当使用230nm以下的检测波长时，如果条件允许，最好使用乙腈，可以避免基线波动，其余类推； 7.仪器出现问题也会造成基线波动，比如(1)流动相过滤头堵塞、入口主动阀滤芯污染、单向阀被污染物堵塞、泵头有气泡、比例阀出故障、系统流路漏液，比如管路裂开、peek接头没完全连上色谱柱而导致的泄露等； 8.没有脱气机的仪器，当流动相未脱气或脱气未彻底时，基线也会波动；有脱气机的每次使用前都要检查一下是否正常工作； 9.当大家使用梯度作为组分洗脱方式的时候，有条件的最好使用超纯水，磷酸盐、三乙胺等固体液体加入试剂也最好使用HPLC级别的，因为在梯度中随着有机相（洗脱力较强）的不断增加，流动相系统里的杂质会在基线上反映出来，导致出现鬼峰或基线波动； 10.流动相中的有机相和缓冲液的比例一定要注意调配好，缓冲液的比例不能过大，要不然会出现缓冲盐在柱子里析出的情况，这样不但会造成基线波动的发生，甚至会造成色谱柱毁坏； 11.当色谱柱被污染时，也会造成基线波动，这里尤其要注意的是大家在做合成中控实验的时候，最好不要用合成的原始反应液直接进样，因为原液里面有很多非极性或极性很小的化合物，一旦进入到反相色谱柱里和非极性的C18发生相互作用，很可能就洗脱不下来使色谱柱变性或者慢慢的被洗脱下来，造成以后的分析出现不稳定的鬼峰或者基线波动； 12.一些比较老的液相仪对电压要求很高，电压有点起伏检测器就会反映教明显，比如老的惠普和岛津等仪器，这时需要配一个稳压电源来解决此问题；此外仪器和电脑之间连接的数据线出问题或老化也可能会使基线波动。 当然上面说了这么多的原因，个人认为还不是很全面，有些没考虑到得地方还请大家不吝补充，以致共同进步，谢谢！ [ Last edited by leecius on 2011-6-14 at 19:51 ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 读研时可用 | 化学类学习资料 | 化学生物学 | 药物合成 |
| 回复 | 药物分析 | 高效液相分析 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
春天外» 猜你喜欢
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
高效液相色谱基线一直往下飘哎，求大神指点
已经有10人回复
- 高效液相色谱中出现的一些问题？
已经有10人回复
- 高效液相色谱梯度，基线往下走
已经有4人回复
- 高效液相的基线问题
已经有10人回复
- 关于高效液相色谱样品溶解
已经有8人回复
- 关于高效液相色谱梯度洗脱的问题
已经有13人回复
- 有关高效液相色谱内标的筛选
已经有3人回复
- 求助，急！高效液相基线不平
已经有34人回复
- 高效液相色谱，如果选用极性小的溶剂如氯仿，样品中可容许的最小比例是多少呢
已经有9人回复
- 液相基线向上漂移
已经有8人回复
- 刚开始做红外，红外光谱基线漂移有哪些因素引起的呢？
已经有4人回复
- 液相色谱保留时间波动范围
已经有10人回复
- GC的 FID基线波动厉害
已经有5人回复
- 高效液相基线波动
已经有8人回复
- 为什么液相色谱基线严重漂移？
已经有18人回复
- 液相色谱基线出现波浪，如何解决？
已经有14人回复
- 【求助】高效液相不停泵直接关电源有影响吗？
已经有4人回复
- 【求助】HPLC基线漂移问题
已经有11人回复
- 【求助】液相色谱基线很不稳定，漂移比较严重！怎么解决？
已经有3人回复
- 【求助】我走高效液相色谱的基线为什么会这样？（这次图可以看到了）
已经有19人回复
- 【讨论】高效液相色谱法梯度耐用性怎么做
已经有13人回复
- 【求助】关于高效液相色谱的
已经有8人回复
- 【求助】液相的基线漂移
已经有49人回复
- 【求助】液相色谱基线不平
已经有18人回复
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
|
本帖内容被屏蔽 |
3楼2011-06-12 23:01:33
delan
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1411.1
- 红花: 1
- 帖子: 580
- 在线: 165.9小时
- 虫号: 1015621
- 注册: 2010-05-10
- 性别: GG
- 专业: 药物分析
2楼2011-06-12 22:55:09
xiaoxiao270
至尊木虫 (著名写手)
- PhEPI: 8
- 应助: 137 (高中生)
- 贵宾: 1.744
- 金币: 11275.8
- 散金: 7133
- 红花: 143
- 帖子: 2589
- 在线: 431.1小时
- 虫号: 1132172
- 注册: 2010-10-26
- 性别: GG
- 专业: 天然药物化学
4楼2011-06-12 23:19:28
5楼2011-06-13 08:03:15
痴夷子皮
版主 (文坛精英)
老痞
- PhEPI: 10
- 应助: 2016 (讲师)
- 贵宾: 5.368
- 金币: 54487.3
- 散金: 41688
- 红花: 303
- 沙发: 1206
- 帖子: 32611
- 在线: 4303.7小时
- 虫号: 674536
- 注册: 2008-12-14
- 性别: GG
- 专业: 无神论
- 管辖: 人文社科
6楼2011-06-13 08:17:01
zhihua0207
木虫 (正式写手)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 2786.6
- 红花: 4
- 帖子: 689
- 在线: 257.3小时
- 虫号: 755378
- 注册: 2009-04-23
- 性别: GG
- 专业: 药剂学
7楼2011-06-13 10:36:29
8楼2011-06-13 11:05:16
春天外
金虫 (小有名气)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 1436.9
- 红花: 1
- 帖子: 99
- 在线: 207.6小时
- 虫号: 1210712
- 注册: 2011-02-23
- 性别: GG
- 专业: 中药学其他科学问题
9楼2011-06-13 13:06:58
春天外
金虫 (小有名气)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 1436.9
- 红花: 1
- 帖子: 99
- 在线: 207.6小时
- 虫号: 1210712
- 注册: 2011-02-23
- 性别: GG
- 专业: 中药学其他科学问题
10楼2011-06-13 13:07:26
