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银虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
silicare(金币+3, EPI+1): 2011-06-10 12:20:50
churmi(金币+5): 2011-06-13 21:58:25

引用回帖:

Originally posted by churmi at 2011-06-08 20:39:58:
做了两锅梯度稀释的标准曲线
早上的那锅发现后面三个低浓度梯度的基本不出峰，或者峰很低
于是下午就从10倍稀释变为5倍稀释
但是结果显示曲线的拟合度不好R值从早上的0.94讲到0.76了，扩增效率增加了20%；
同 ...

1. 5个点足够了，但是不能少于5个。R值不能低于0.998 ，否则文章不收。其实这个R值很好做到的。我都是加96孔板，同是做几条标曲，用来测扩增效率。只要每步注意分装混匀就没问题，自己先规划好。
2.加完样最好离心，因为8连管在你盖帽子的时候往往会溅起液滴。
3.溶解曲线程序不是试剂盒决定的，是机器决定的。你机器能支持多高的精度，你实验需要多高的精度。比如：你如果想知道最后产物的TM精确到0.1°，那你就调0.1°采一次数据，只要你机器能做到。
4.你的实验，我建议先在纸上把加样过程写好，每步加什么，怎么加，加多少。另外，少量的比如：引物模板一定不要一次次加，要大量加然后分装，否则R值很难达到。每个设3个平行。最后，提醒下，要先排除你稀释产物的操作没问题，也就是梯度模板没问题。

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2楼2011-06-09 13:31:16

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