24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 919  |  回复: 3
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看

zh1987hs

金虫 (著名写手)

分子模拟新手

[求助] 如何提高重组蛋白在大肠杆菌中的表达量

1.实验将两种相似性较高的酶编码基因进行了区域重组(即把A的一部分序列换成B的),A和B在大肠杆菌中都能正常表达
2. 将A经过区域重组的基因转化到大肠进行表达,发现37度,诱导3h表达量比较低,尝试利用低温诱导,20度,18h。活性略有提高,但是仍然比较低,不知道各位还有没有别的方法可以提高蛋白的可溶表达量?
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabxxh

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
zh1987hs(金币+2): 非常感谢 2011-06-08 14:44:50
1949stone(金币+2): 很活跃啊 鼓励 2011-06-08 16:15:55
这个必须要可溶蛋白吗?话说可溶蛋白表达本来就不是很高吧,要大量获得,就会形成包涵体,还是要经过包涵体和复性,或者可以换个菌株,或者改变iptg的浓度来试一下,看看楼下有什么高见
2楼2011-06-08 14:42:07
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zh1987hs

金虫 (著名写手)

分子模拟新手

引用回帖:
Originally posted by yabxxh at 2011-06-08 14:42:07:
这个必须要可溶蛋白吗?话说可溶蛋白表达本来就不是很高吧,要大量获得,就会形成包涵体,还是要经过包涵体和复性,或者可以换个菌株,或者改变iptg的浓度来试一下,看看楼下有什么高见

谢谢,不用特别高,和母本的蛋白差不多就可以了~俺测过蛋白量,大概只有5 mg/L, 量应该是比较小的了,母本蛋白可以有500 mg/L.都是没有经过浓缩的情况下测得
3楼2011-06-08 14:44:37
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

475502411

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 同意!不同蛋白诱导条件不一样,要优化的话就得做梯度。 2011-06-08 18:52:21
zh1987hs(金币+2): 谢谢~实在不行我就做个表面响应优化一下这两个因素吧~哈哈~1是1mM吧 2011-06-08 19:22:39
你可以做一下诱导剂的梯度和诱导时间的梯度,这两个因素影响挺大的,我们实验室有的诱导剂的浓度是1,诱导时间是4h,表达量挺高的,你可以试试
可以朝九晚五,也能浪迹天涯
4楼2011-06-08 16:58:39
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zh1987hs 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +9 vv迷 2026-03-22 9/450 2026-03-27 15:59 by 不吃魚的貓
[考研] 化学调剂 +3 爱吃番茄的旭 2026-03-24 4/200 2026-03-27 15:43 by shangxh
[考研] 283求调剂(080500) +4 A child 2026-03-27 4/200 2026-03-27 15:34 by XPU李庆
[考研] 安徽大学专硕生物与医药专业(086000)324分,英语已过四六级,六级521,求调剂 +4 美味可乐鸡翅 2026-03-26 4/200 2026-03-27 15:27 by 星空星月
[考研] 305求调剂 +5 哇卢卡库 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:01 by laoshidan
[考研] 一志愿武汉理工,总分321,英一数二,求老师收留。 +5 nnnnnnn5 2026-03-25 5/250 2026-03-27 04:42 by wxiongid
[考研] 325求调剂 +5 李嘉图·S·路 2026-03-23 5/250 2026-03-27 00:42 by wxiongid
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +17 RichLi_ 2026-03-25 17/850 2026-03-26 19:44 by plmuchong
[考研] 085602化学工程求调剂。 +4 平乐乐乐 2026-03-26 4/200 2026-03-26 17:57 by fmesaito
[考研] 材料考研求调剂 +3 Dendel 2026-03-23 6/300 2026-03-26 17:51 by fmesaito
[考研] 材料科学与工程 317求调剂 +4 JKSOIID 2026-03-26 4/200 2026-03-26 15:58 by 不吃魚的貓
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +9 Mr. Z 2026-03-25 9/450 2026-03-26 10:36 by baoball
[考研] 一志愿天津大学339材料与化工求调剂 +3 江往卖鱼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:42 by 王小欠i
[考研] 打过很多竞赛,085406控制工程300分,求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-24 3/150 2026-03-24 21:31 by peike
[考研] 环境学硕288求调剂 +8 皮皮皮123456 2026-03-22 8/400 2026-03-23 23:47 by 热情沙漠
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
信息提示
请填处理意见