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zh1987hs

金虫 (著名写手)

分子模拟新手

[求助] 如何提高重组蛋白在大肠杆菌中的表达量

1.实验将两种相似性较高的酶编码基因进行了区域重组（即把A的一部分序列换成B的），A和B在大肠杆菌中都能正常表达
2. 将A经过区域重组的基因转化到大肠进行表达，发现37度，诱导3h表达量比较低,尝试利用低温诱导，20度，18h。活性略有提高，但是仍然比较低，不知道各位还有没有别的方法可以提高蛋白的可溶表达量？
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1楼 2011-06-08 14:32:21
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yabxxh

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
zh1987hs(金币+2): 非常感谢 2011-06-08 14:44:50
1949stone(金币+2): 很活跃啊 鼓励 2011-06-08 16:15:55
这个必须要可溶蛋白吗？话说可溶蛋白表达本来就不是很高吧，要大量获得，就会形成包涵体，还是要经过包涵体和复性，或者可以换个菌株，或者改变iptg的浓度来试一下，看看楼下有什么高见
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2楼2011-06-08 14:42:07
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zh1987hs

金虫 (著名写手)

分子模拟新手
引用回帖:
Originally posted by yabxxh at 2011-06-08 14:42:07:
这个必须要可溶蛋白吗？话说可溶蛋白表达本来就不是很高吧，要大量获得，就会形成包涵体，还是要经过包涵体和复性，或者可以换个菌株，或者改变iptg的浓度来试一下，看看楼下有什么高见

谢谢，不用特别高，和母本的蛋白差不多就可以了~俺测过蛋白量，大概只有5 mg/L, 量应该是比较小的了，母本蛋白可以有500 mg/L.都是没有经过浓缩的情况下测得
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3楼2011-06-08 14:44:37
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475502411

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 同意！不同蛋白诱导条件不一样，要优化的话就得做梯度。 2011-06-08 18:52:21
zh1987hs(金币+2): 谢谢~实在不行我就做个表面响应优化一下这两个因素吧~哈哈~1是1mM吧 2011-06-08 19:22:39
你可以做一下诱导剂的梯度和诱导时间的梯度，这两个因素影响挺大的，我们实验室有的诱导剂的浓度是1，诱导时间是4h，表达量挺高的，你可以试试
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
4楼2011-06-08 16:58:39
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