24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 4240  |  回复: 54
本帖产生 2 个 MolEPI ,点击这里进行查看

churchill87426

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by ljp7786 at 2011-06-08 16:37:46:
首先确定你的PCR产物平末端还是粘末端,如果是平末端,PCR产物跑胶回收后做一个加A反应,再和T载体连。
其次,你的片段多大,1KB以上,我认为需要多连一段时间,最好4度过夜,4度下连接比较稳定,16度连接连接产 ...

请问“加入链接酶前在65度热击5min,置冰上速冷2分钟” 是什么原理啊?
我也在TA克隆...也连不上...我的片段2100bp
41楼2011-06-11 17:51:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuzuobin125

铜虫 (小有名气)

经过这么多童鞋的努力和总结,LZ的问题应该是解决了。生物实验不像做木工,任何时候和环节都能看得到摸得着,如果实验失败了,那就要从实验的开始理清思路,回放实验过程,然后是针对每个环节进行排除,只有这样才能让自己有信心将实验进行下去,而且一旦将问题找到,这将极大增强自己的实验信心。
42楼2011-06-12 11:32:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

菜菜的夏子

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by wuzuobin125 at 2011-06-12 11:32:03:
经过这么多童鞋的努力和总结,LZ的问题应该是解决了。生物实验不像做木工,任何时候和环节都能看得到摸得着,如果实验失败了,那就要从实验的开始理清思路,回放实验过程,然后是针对每个环节进行排除,只有这样才 ...

嗯嗯,我就是来报喜加感谢各位的~我的实验昨天已经做出来了,是我用的连接酶失活了。郁闷的是,我换了实验室好几种连接酶,竟然全部失活了,后来实验成功后恍惚记得好像有一次停电冰箱化了……直到重新买了一管新的,才做出来了……唉,浪费了好多时间……
    不过庆幸的是做出来了,TA克隆和我自己的载体片段连接都成功了,这还得感谢各位给我的意见和建议,小木虫真不错!从昨天开始心情就一直不错,呵呵,谢谢各位啦!以后多多交流呀
43楼2011-06-12 15:08:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

送鲜花一朵
恭喜恭喜
欢迎常来交流啊~
44楼2011-06-12 18:03:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

菜菜的夏子

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-06-12 18:03:52:
恭喜恭喜
欢迎常来交流啊~

嗯嗯
45楼2011-06-12 21:11:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

daiyuanfeng

新虫 (初入文坛)

大家好,我最近做了一个月16S的测序了,测不出来,总是出现问题。最后把目的片段与T载体链接,转化之后挑单菌落摇菌,但提不出质粒,师兄师姐说是没有连接上,请教各位高手
我的流程是:1、纯化PCR产物,然后与T载体连接,置于16摄氏度过夜连接(我也连接过3-4h)  体系:
pMD19-T                        0.5uL
DNA                              4.5uL
Solution 1                5uL
2、全量(10uL)转化至100uL的E.coli DH5α的感受态细胞。
(1) 将10μL连接液移入含100μL感受态细胞的1.5mL Ep管中,冰浴30min。
(2) 42℃水浴热激0-690sec后,立即再冰浴2-3min。
(3) 加入900μL LB液体培养基,37℃ 150 rpm培养1h。
(4) 吸100μL菌液涂布含X-gal100和Amp100平板培养基的LB固体培养基平板, 37℃ 培养8-14h
最后全是白斑,一个蓝斑都没有,挑单菌落划线,用16S的引物PCR验证,然后摇菌,菌液很浓,就是提不出质粒,这是为什么呢?
46楼2012-03-28 16:47:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

动力泉

金虫 (正式写手)

会不会是切胶回收的时间太长导致PCR产物形成二聚体,建议重新回收产物
好好学习
47楼2012-05-21 13:31:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

聂子3388

铜虫 (小有名气)

你可以不用在PCR仪上酶连,在保温盒里酶连过夜。我之前在PCR仪上酶连也没转化成功,但是在保温盒里就成功了
48楼2013-07-15 15:57:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyphen007

金虫 (小有名气)

同意3楼,还有,你的目的片段多大?
49楼2013-07-15 19:49:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (初入文坛)

本帖仅楼主可见
50楼2013-07-16 11:34:00
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
相关版块跳转 我要订阅楼主 菜菜的夏子 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 083000学硕274求调剂 +3 Li李鱼 2026-03-26 3/150 2026-03-27 18:02 by yu221
[考研] 352分 化工与材料 +3 海纳百川Ly 2026-03-27 3/150 2026-03-27 17:18 by 杨杨杨紫
[考研] 328求调剂 +6 嗯滴的基本都 2026-03-27 6/300 2026-03-27 16:49 by sanrepian
[考研] 085701环境工程,267求调剂 +9 minht 2026-03-26 9/450 2026-03-27 15:29 by licg0208
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +7 邱gl 2026-03-27 7/350 2026-03-27 15:27 by Joe率
[考研] 279 分 求调剂 +4 睡个好觉_16 2026-03-24 4/200 2026-03-27 15:05 by 醉在风里
[考研] 0703一志愿9,初试成绩:338,四六级已过,有科研经历,求调剂! +3 Zuhui0306 2026-03-25 3/150 2026-03-27 14:09 by shangxh
[考研] 339求调剂 +4 烤麦芽 2026-03-27 5/250 2026-03-27 13:23 by 752105528
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-27 07:58 by chemisry
[考研] 329求调剂 +7 钮恩雪 2026-03-25 7/350 2026-03-27 04:28 by wxiongid
[考研] 324求调剂 +4 wysyjs25 2026-03-21 4/200 2026-03-26 20:38 by fmesaito
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料,材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 8/400 2026-03-26 20:34 by Higraduate
[考研] 机械学硕310分,数一英一,一志愿211本科双非找调剂信息 +3 @357 2026-03-25 3/150 2026-03-26 16:34 by by.MENG
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +9 holy J 2026-03-21 9/450 2026-03-26 15:47 by 161765490
[考研] 281求调剂 +6 Koxui 2026-03-24 7/350 2026-03-26 15:37 by 无际的草原
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
信息提示
请填处理意见