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tjutrevor金虫 (正式写手)
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[求助]
蛋白纯化分离问题
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目前在做酶的分离纯化，报道的仅有4个相同功能的酶，但是比对后基本没有保守序列。。。 我做的菌也没有全基因组序列。。。 是不是只能一步一步纯化，直到SDS一条带？ 实验时先过阴离子交换，后过分子筛，但是效果也不好。SDS的杂带较多，但是有一条带貌似是要找的。不知切胶做N端测序可不可以？引物如何设计呢？ 还望请大牛们指点。谢谢了 |
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 蛋白质生物学实验经验 | 电泳、bio-rad 电转化仪及操作 |
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【答案】应助回帖
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silicare(金币+3): 鼓励交流 2011-06-03 18:18:13
silicare(金币+3): 鼓励交流 2011-06-03 18:18:13
| 谈下俺的建议。。我感觉首先应该先按照分子量先过一个分子筛。。粗分下符合分子量范围的蛋白。。然后再过阴离子（当然是根据您蛋白的性质）进行细分。。如果离子交换分的还不干净的话。。来个强阴离子交换。。先阴离子的话我感觉。。毕竟载量有限。。杂蛋白很多。。可能你的目的蛋白结合效果不会太好。。会有较多浪费。。不如先分子筛再离子交换。。至于测序的问题。。N端的蛋白测序好像不用设计引物捏。。质谱好像就行。。当然N端的10个之内好像挺准（价钱好像也不贵捏）。。太多恐怕就信号不太强了。。。不知道你这个左右的氨基酸能否作为鉴别标准。。 |
5楼2011-06-03 11:37:28