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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+5, EPI+1): good 2011-06-03 18:16:54
tjutrevor(金币+20): 多谢！我是先硫氨沉淀的，不过没有脱盐 2011-06-05 14:38:30

1、你的菌既然没有全基因测序，那么就不能设计引物来直接克隆。
2、如果报道的仅有4个相同功能的酶，但是比对后基本没有保守序列，那就是说你的酶纯化出来之后可能会容易发文章。
3、蛋白质纯化是需要一步一步来的，野生酶只要一步就能纯化就很夸张。
4、为什么要先用离子交换层析柱？无论什么方法来培养的微生物，得到的酶，都会有很多杂质，包括细胞碎片和培养基成分等等，还有一些盐，这样的酶液要用离子交换层析柱就必须先去盐，而且有一些杂质还不一定能用0.22微米的滤膜过滤去掉，所以我认为第一步可以先用某种方法来初步纯化，例如硫酸铵沉淀和小分子有机溶剂沉淀，这样能去掉很多杂质，包括一些蛋白质杂质。假如是硫酸铵沉淀，那就可以立即用疏水层析柱，假如是有机溶剂沉淀，那么下一步可以去掉小分子有机溶剂，反正也要脱盐的，盐和小分子有机溶剂都可以被除掉。这样一来就更好了。
5、凝胶过滤的效率是比较差的，不到不得已就别用，而且要求上样的样品体积要小，在缩小体积这一步说不定会损失蛋白质，说不定你的酶也有损失。
6、既然条带很多，那就说明你要的那条带说不定也不纯，打质谱都可能打不出来，测序也一样可能测不出来，还是先纯一点再考虑切胶保险。