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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取
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yesucao

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒提取

不知道为什么最近两次提取的质粒老是如图这样子，条带模糊、弥散。挑取的是转化子
摇菌、使用溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和醋酸铵和氯化锂提取的，前几天刚提过其他的质粒，能提好，不存在试剂的问题（不过挑取转化子时没提好，之后甘油管活化再挑取的单菌落才提好）；每次都是本人亲自动手，应该也不存在操作问题吧！
还请各位大虾帮忙分析一下，中间一个是Marker（4微升点样），其他均为质粒（5微升点样）
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1楼 2011-06-01 11:02:24
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 确实如此，我也曾经把溶液2放4℃冰箱，都沉淀了。后面加热下就好了。 2011-06-03 21:51:20
引用回帖:
Originally posted by healerly at 2011-06-03 18:19:46:
那我是否可以理解为您认为冰箱的空气环境和室外的环境是一样的啊？？放冰箱的理由无非就是减缓这个这个过程的发生啊~~

不知道从室温转移到四度，氢氧化钠吸收二氧化碳的速度会减缓多少，但是SDS如果温度低是会析出的（我曾经把溶液二放进四度），不知道你配成溶液二的时候有没有观察到什么现象。

而且空气环境不用计较，我放进四度的瓶子都是密封的，你不密封？
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
16楼2011-06-03 21:06:18
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healerly

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
yesucao(金币+3): 实验室的溶液2是高浓度的，放在室温有一段时间了，对于保存时间和问题之前没多大考虑 2011-06-01 17:49:55
yesucao(金币+7): 2011-06-01 17:50:15
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-01 18:26:53
本帖内容被屏蔽
2楼2011-06-01 13:32:05
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sxq大嘴

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 欢迎交流。为什么呢？ 2011-06-01 18:27:04
溶液2的问题，要不就是有DNA酶污染
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3楼2011-06-01 14:16:54
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yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by healerly at 2011-06-01 13:32:05:
1.可能是溶液二的问题，因为碱裂解法中二溶液，一般是现配现用，也可以用高浓度稀释，不知道你NaOH是怎么保存的？
2.如果不是溶液的问题的话，那就是电泳的问题了，看看是不是电压太大了~~

溶液2 是2%的SDS和0.4M的氢氧化钠，用的时候分别加100微升，均是室温保存；
每次跑电压一般是在90-100V之间
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4楼2011-06-01 17:40:54
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