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yesucao

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒提取

不知道为什么最近两次提取的质粒老是如图这样子,条带模糊、弥散。挑取的是转化子
摇菌、使用溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和醋酸铵和氯化锂提取的,前几天刚提过其他的质粒,能提好,不存在试剂的问题(不过挑取转化子时没提好,之后甘油管活化再挑取的单菌落才提好);每次都是本人亲自动手,应该也不存在操作问题吧!
还请各位大虾帮忙分析一下,中间一个是Marker(4微升点样),其他均为质粒(5微升点样)
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yesucao

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by healerly at 2011-06-01 13:32:05:
1.可能是溶液二的问题,因为碱裂解法中二溶液,一般是现配现用,也可以用高浓度稀释,不知道你NaOH是怎么保存的?
2.如果不是溶液的问题的话,那就是电泳的问题了,看看是不是电压太大了~~

溶液2 是2%的SDS和0.4M的氢氧化钠,用的时候分别加100微升,均是室温保存;
每次跑电压一般是在90-100V之间
4楼2011-06-01 17:40:54
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healerly

禁虫 (小有名气)

★ ★ ★
yesucao(金币+3): 实验室的溶液2是高浓度的,放在室温有一段时间了,对于保存时间和问题之前没多大考虑 2011-06-01 17:49:55
yesucao(金币+7): 2011-06-01 17:50:15
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-01 18:26:53
本帖内容被屏蔽

2楼2011-06-01 13:32:05
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sxq大嘴

铁虫 (初入文坛)

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 欢迎交流。为什么呢? 2011-06-01 18:27:04
溶液2的问题,要不就是有DNA酶污染
3楼2011-06-01 14:16:54
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healerly

禁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3, EPI+1): 鼓励应助 2011-06-01 21:04:26
引用回帖:
Originally posted by yesucao at 2011-06-01 17:40:54:
溶液2 是2%的SDS和0.4M的氢氧化钠,用的时候分别加100微升,均是室温保存;
每次跑电压一般是在90-100V之间

1.NaOH建议还是4度保存吧,还有就是如果在提质粒的时候如果加完二溶液冰浴5-10分钟后还没有粘稠的话,就没必要做下去了。
2.看看电流吧,会不会电泳液时间太长了。
heal the world!!!
5楼2011-06-01 18:29:24
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