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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取
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yesucao

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒提取

不知道为什么最近两次提取的质粒老是如图这样子，条带模糊、弥散。挑取的是转化子
摇菌、使用溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和醋酸铵和氯化锂提取的，前几天刚提过其他的质粒，能提好，不存在试剂的问题（不过挑取转化子时没提好，之后甘油管活化再挑取的单菌落才提好）；每次都是本人亲自动手，应该也不存在操作问题吧！
还请各位大虾帮忙分析一下，中间一个是Marker（4微升点样），其他均为质粒（5微升点样）
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1楼 2011-06-01 11:02:24
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
1949stone(金币+1): 的确有疑问 2011-06-04 11:14:27
什么样的ladder，什么样的转化子，多大的质粒，提取质粒的详细步骤是怎样的？
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2011-06-01 18:49:38
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶
★ ★
dhd997(金币+2): 一步步的解决 2011-06-02 09:07:36
Ladder跑得那么好，说明你的电压和电流可能没问题。
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7楼2011-06-02 01:49:57
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶
引用回帖:
Originally posted by healerly at 2011-06-01 18:29:24:
1.NaOH建议还是4度保存吧，还有就是如果在提质粒的时候如果加完二溶液冰浴5-10分钟后还没有粘稠的话，就没必要做下去了。
2.看看电流吧，会不会电泳液时间太长了。

NaOH为什么要4度保存，理由是什么？

加了溶液二之后为什么要零度处理？

你加了溶液二之后为什么要那么久才能破碎细胞？一加进去之后就已经破碎了。

条带好不好和电泳时间无关。

你提过质粒吗？
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11楼2011-06-02 17:59:01
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶
★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-06-04 11:14:50
看点样孔里发亮，是一部分DNA被阻挡住下不来，甚至有的泳道根本没有条带，DNA大部分被挡住了，是提质粒的时候杂质没有抽提干净。看步骤里是用氯化锂抽提的，这一步应该出了问题。条带也弥散，就不知道是什么原因了。用苯酚氯仿抽提效果会怎样？不知道条带弥散的问题会不会顺道解决了。
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12楼2011-06-02 18:20:44
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 很热心，一步一步帮楼主分析呢。连前面的一并奖励！ 2011-06-03 18:37:57
氢氧化钠会长菌？0.1M的pH值就已经超过11了，长菌是因为pH值降下去了。氢氧化钠会吸收空气中的二氧化碳变成碳酸钠，但碳酸钠本身就是碱式盐，无论是放哪里，只要有空气，这个反应就会发生。

做宏基因组文库的时候电泳要超过8小时，条带一样好。质粒之类的一百毫安半小时也是经常事。
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14楼2011-06-02 18:37:35
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 确实如此，我也曾经把溶液2放4℃冰箱，都沉淀了。后面加热下就好了。 2011-06-03 21:51:20
引用回帖:
Originally posted by healerly at 2011-06-03 18:19:46:
那我是否可以理解为您认为冰箱的空气环境和室外的环境是一样的啊？？放冰箱的理由无非就是减缓这个这个过程的发生啊~~

不知道从室温转移到四度，氢氧化钠吸收二氧化碳的速度会减缓多少，但是SDS如果温度低是会析出的（我曾经把溶液二放进四度），不知道你配成溶液二的时候有没有观察到什么现象。

而且空气环境不用计较，我放进四度的瓶子都是密封的，你不密封？
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16楼2011-06-03 21:06:18
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