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yanfeier

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达 难

最近在忙一段基因的表达,但是连到PET-32a上面,就是不表达,不知道具体的原因出在什么地方?37度  IPTG终浓度1mM   过夜诱导,请各位帮帮找找原因
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yanfeier

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by lly198784 at 2011-05-29 15:48:56:
表达载体针对你的宿主菌是表达的吗?有文献报道吗?诱导剂加入的时间及诱导剂浓度以及诱导时间很重要的哦!

是有文献报道的,我才首先选这个载体的。我们是在OD在0.6-0.8之间诱导的,1mM的浓度,诱导过夜的
12楼2011-05-30 09:15:25
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查看全部 18 个回答

gagalady

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

yanfeier(金币+1): 2011-05-30 09:13:31
想知道你想表达的这段基因的来处 什么基因呀
也许换换表达菌
2楼2011-05-29 10:48:51
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
dhd997(金币+4): 是啊 2011-05-29 12:26:25
yanfeier(金币+2): 2011-05-30 09:13:38
1:诱导温度有没有试试?
2:诱导剂浓度呢?
3:如果前两者做过了,那么你的引物设计是否有问题?
4:实在不行,换载体吧、
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-05-29 11:51:30
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sfb1020

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 可以试试 2011-05-29 13:48:17
yanfeier(金币+1): 2011-05-30 09:13:46
你要表达的蛋白可能对表达菌有毒性,可以换个表达菌试试
4楼2011-05-29 13:29:51
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