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bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


amisking(金币+1, EPI+1): 鼓励应助 2011-05-24 21:10:11
潇乾魂(金币+3): 2011-05-26 10:31:04
1.做个温度梯度试试,看看哪个温度合适
2.改变一下循环数,看看是不是循环数太多
3.检查一下引物,错误引发是不是比较高,
4.建议传个图上来,有助于大家分析
5楼2011-05-24 17:23:28
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智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
潇乾魂(金币+5): 2011-05-25 17:17:32
amisking(EPI+1): 鼓励应助 2011-05-25 19:52:59
amisking(金币+5): 鼓励应助 2011-05-25 19:53:08
引用回帖:
Originally posted by 潇乾魂 at 2011-05-25 13:20:58:
附件图就是,出现很多,那时的退火温度是55度,升到60度后还有一些,谢谢了

你的marker在哪里?目的条带有多大?杂带是有点多。。。
首先温度梯度是这样设计的,先看看你两条引物的Tm值,之和然后除以2;比如算下来是55度,可以上下各扩4度,比如设5个梯度,可以是51 53 55 57 59,当然了温度梯度的间距可以小一些(退火温度不是乱设置的);

你可以按照我说的做一下,看看哪一个温度下条带最亮,杂带最少,那么就选用此温度大量进行PCR吧。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
9楼2011-05-25 15:53:01
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