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PAMAM树状化合物作为呼吸道合胞病毒基因 疫苗递送载体的研究
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DNA疫苗能刺激机体产生细胞免疫与体液免疫，其制造成本低廉，易于储存及运输。但是，裸DNA疫苗在体内传输过程中，很容易被酶水解，不能引起足够的免疫原性，很难达到好的免疫保护效果。DNA递送载体能够保护DNA分子不被酶水解。本课题选取聚酰胺．胺(PAMAM)树状化合物作为基因疫苗递送载体，通过细胞毒性实验及细胞凋亡实验研究了PAMAM G4及PAMAM G5在多种细胞系中的毒性，在此基础上初步探索了该树状化合物作为人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus．RSV)基因疫苗载体的在动物模型上应用。选取多个不同的电荷(N／P)比，制备PAMAM／DNA复合物，琼脂糖凝胶电泳结果表明，PAMAM G4及PAMAM G5都能够与DNA形成复合物。酶切保护实验结果表明，形成复合物后，DNA不被核酸酶降解，即PAMAM能够有效保护所携带的DNA分子不被降解。为进一步探索PAMAM的细胞毒性，分别选取了HEK293细胞、HepG2细胞、U251细胞及A549细胞进行毒性实验。结果表明，对于同种细胞系PAMAM G5的细胞毒性高于PAMAM(34的细胞毒性。PAMAM(M 48 h的半抑制率在0.1 μg／μL，而PAMAM G5 48 h的半抑制率在0.05μg／μL。对于同一种PAMAM载体，随着浓度的增加毒性增大，细胞毒性呈现剂量依赖性。细胞凋亡实验结果表明，PAMAM在加入24 h后能够导致一些细胞坏死或晚期凋亡，早期凋亡现象不明显，同时，细胞坏死或晚期凋亡程度也呈现剂量依赖性，与MTT检测结果一致。在以上实验的基础上，选取N／P比为10：1作为免疫小鼠实验制备PAMAM／DNA复合物的标准。小鼠免疫实验初步结果表明经腿部肌肉注 射PAMAM／DNA复合物，小鼠产生相应抗体。  |
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