| 查看: 5276 | 回复: 2 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
yixinyuan木虫 (正式写手)
|
[求助]
抗凝剂对全血基因组DNA及其PCR的影响
|
|
| 提取全血基因组DNA使用哪种抗凝剂对其PCR影响小呢？查文献提到说肝素影响较大，那么用EDTA或者柠檬酸钠影响怎么样么？ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有291人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 有关提取全血DNA和RNA问题。
已经有4人回复
- 动植物样品的采集及DNA样品的提取(ZT)
已经有10人回复
- 基因组DNA提取问题
已经有32人回复
- 全血基因组的提取问题
已经有6人回复
- 小鼠肝脏基因组DNA提取大部分降解为300-500bp了
已经有11人回复
- 基因组中长片段PCR应该注意的几个问题
已经有14人回复
- HindIII酶切基因组DNA
已经有4人回复
- 【求助/交流】我刚提的植物基因组DNA的电泳图，请高手看看
已经有12人回复
- 【求助/交流】提取的植物基因组DNA电泳图，疑问？？？
已经有17人回复
ycyycy
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 755.4
- 帖子: 267
- 在线: 55.6小时
- 虫号: 532299
- 注册: 2008-03-24
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2011-05-16 22:48:01
cdl007
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 41
- 应助: 46 (小学生)
- 贵宾: 0.025
- 金币: 2570.6
- 红花: 11
- 帖子: 545
- 在线: 123.1小时
- 虫号: 275133
- 注册: 2006-08-27
- 专业: 肿瘤病因
【答案】应助回帖
yixinyuan(金币+2): 谢谢你！ 2011-05-17 06:43:40
|
常用的血液抗凝剂有EDTA、ACD和肝素等，需注意的是，如 欲制备大分子量血液基因组DNA，可优先考虑使用ACD抗 凝。一般不使用肝素抗凝，因为用肝素抗凝的血液提取的基 因组DNA进行PCR扩增时，有PCR扩增抑制现象 或者可以使用75%的乙醇 血液凝固的多个环节中需要C a2 + 的参与, 柠檬酸/ 柠檬酸钠、 草酸铵、 草酸钾、 枸橼酸钠等作 为体外抗凝剂可与C a2 + 结合而除去血液中的C a2 + 离子, 从而发挥抗凝作用[ 5] 。在经过一段时间的冷冻保存后, ACD 抗凝血和EDTA 抗凝血从外观上不如75 % 乙醇好, 其原因 与两者的化学性质发生变化、 对血中C a2 + 结合能力下降有 关。如果在冷冻前, 对经ACD 和ED TA 抗凝的血样加入细 胞裂解液( 10∶ 1) , 经冷冻保存一段时间, 解冻后则会保持较 好的液态状态。 各种活性试剂的效率, 使所提取的DNA 样品质量降低。试 验结果表明, 采用的新鲜血液与抗凝剂的用量( ACD 6∶ 1 EDTA9∶ 1 、 75 % 乙醇1∶ 4) 比例适宜, 抗凝效果正常。另外 抗凝剂最好现配现用, 如ACD 在配制后1 周内使用较好,否 则易产生白色絮状沉淀物,ED TA 放置时间过长, 会与溶液 中的各种离子结合, 使其对血中Ca2 + 等金属离子的螯合能 力下降, 而75 % 乙醇具有挥发作用, 必须密封保存, 使其浓 度保持相对稳定。 参考文献 3 种禽血抗凝剂效果及其对DNA 提取质量的影响 王敏强,曹俊辉,刘晓玲 ( 烟台大学化学生物理工学院,山东烟台2 64005) 一起学习  |
2楼2011-05-16 22:18:46