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yixinyuan木虫 (正式写手)
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抗凝剂对全血基因组DNA及其PCR的影响
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| 提取全血基因组DNA使用哪种抗凝剂对其PCR影响小呢？查文献提到说肝素影响较大，那么用EDTA或者柠檬酸钠影响怎么样么？ |
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cdl007
木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
yixinyuan(金币+2): 谢谢你！ 2011-05-17 06:43:40
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常用的血液抗凝剂有EDTA、ACD和肝素等，需注意的是，如 欲制备大分子量血液基因组DNA，可优先考虑使用ACD抗 凝。一般不使用肝素抗凝，因为用肝素抗凝的血液提取的基 因组DNA进行PCR扩增时，有PCR扩增抑制现象 或者可以使用75%的乙醇 血液凝固的多个环节中需要C a2 + 的参与, 柠檬酸/ 柠檬酸钠、 草酸铵、 草酸钾、 枸橼酸钠等作 为体外抗凝剂可与C a2 + 结合而除去血液中的C a2 + 离子, 从而发挥抗凝作用[ 5] 。在经过一段时间的冷冻保存后, ACD 抗凝血和EDTA 抗凝血从外观上不如75 % 乙醇好, 其原因 与两者的化学性质发生变化、 对血中C a2 + 结合能力下降有 关。如果在冷冻前, 对经ACD 和ED TA 抗凝的血样加入细 胞裂解液( 10∶ 1) , 经冷冻保存一段时间, 解冻后则会保持较 好的液态状态。 各种活性试剂的效率, 使所提取的DNA 样品质量降低。试 验结果表明, 采用的新鲜血液与抗凝剂的用量( ACD 6∶ 1 EDTA9∶ 1 、 75 % 乙醇1∶ 4) 比例适宜, 抗凝效果正常。另外 抗凝剂最好现配现用, 如ACD 在配制后1 周内使用较好,否 则易产生白色絮状沉淀物,ED TA 放置时间过长, 会与溶液 中的各种离子结合, 使其对血中Ca2 + 等金属离子的螯合能 力下降, 而75 % 乙醇具有挥发作用, 必须密封保存, 使其浓 度保持相对稳定。 参考文献 3 种禽血抗凝剂效果及其对DNA 提取质量的影响 王敏强,曹俊辉,刘晓玲 ( 烟台大学化学生物理工学院,山东烟台2 64005) 一起学习  |
2楼2011-05-16 22:18:46
ycyycy
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3楼2011-05-16 22:48:01