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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » PCR, southern 转基因植物阳性检测
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knock

金虫 (小有名气)

[求助] PCR, southern 转基因植物阳性检测

事情是这样的，我用PCR检测转基因植株（T1代），总是只能看到少数几个弱弱的条带，没办法，那就矮子里面挑将军，每个株系挑一个条带稍微比较亮的做基因组大提，继续做SOUTHERN杂交，可就是杂不出来，阳性对照和以前的一个阳性植株（PCR条带很亮）可以杂出来。基因组提取是没有问题的，分光光度计检测浓度纯度都不错。我现在想问的是，基因是遗传丢失了还是怎么回事，若是丢失又为什么还有弱弱的带呢，若没丢失又杂不出来呢。PCR和SOUTHERN的灵敏度哪个更高一点，希望大家不吝赐教。已经在这事上耽搁一个月了，救命
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1楼 2011-05-14 10:49:12
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太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
knock(金币+2): 2011-05-14 15:55:49
amisking(金币+1): 鼓励应助 2011-05-14 19:44:42
1、PCR检测假阳性的情况比较多一些，建议多做几个重复。
2、Southern的酶切效果如何？上样量是多少？
3、我曾经做同位素Southern的灵敏度挺高的，不知道楼主是不是同位素的。基因组的质量没问题的话，操作上可以适当改变一些条件再试！
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2楼2011-05-14 13:39:22
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knock

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 太极拳 at 2011-05-14 13:39:22:
1、PCR检测假阳性的情况比较多一些，建议多做几个重复。
2、Southern的酶切效果如何？上样量是多少？
3、我曾经做同位素Southern的灵敏度挺高的，不知道楼主是不是同位素的。基因组的质量没问题的话，操作上可以 ...

1 PCR重复了很多次了，结果都是一样。
2 SOUTHERN酶切电泳后弥散得很好，上样30ug
3 我们用的是地高辛的试剂盒，有一个以前的阳性株能检测出来（回收PCR产物双链的阳性和质粒阳性都能杂出来），所以SOUTHERN我感觉没问题。
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3楼2011-05-14 15:55:40
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太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

knock(金币+4): 2011-05-14 19:27:35
地高辛的我也做过，也是只有CK+出了，别的都没出，后来就再也不做地高辛了。。。楼主可以尝试一下同位素
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4楼2011-05-14 17:07:46
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henghengyouyou

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

knock(金币+4): 2011-05-26 22:33:13
T1代的条带应该扩增很亮的，你的探针可能被阳性对照弄走了！猜测！
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5楼2011-05-16 20:10:12
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