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yingcun

新虫 (初入文坛)

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[求助] 关于毕赤酵母

毕赤酵母GS115菌落PCR，网上查到微波炉法和水浴法。直接挑菌体在EP管微波炉加热5min，pcr后跑出的胶什么都没有；还试过把液体菌水浴加热，但还是pcr后什么条带都出不来。到底是为什么？或者还有什么方法么？

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1楼 2011-05-05 16:41:02

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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-06 08:46:31

引用回帖:

Originally posted by yingcun at 2011-05-05 16:41:02:
毕赤酵母GS115菌落PCR，网上查到微波炉法和水浴法。直接挑菌体在EP管微波炉加热5min，pcr后跑出的胶什么都没有；还试过把液体菌水浴加热，但还是pcr后什么条带都出不来。到底是为什么？或者还有什么方法么？

推荐煮一冻一煮法。
将1mL菌液2 500 X g离心5 min,弃上清，沉淀中加入500 uL TE悬浮沉淀，2500Xg离心3m in;弃上清，重复一次，最后沉淀溶于100 uLTE,沸水浴10 min，-20℃冷冻30 min,再次沸水浴10 min,2 500 X g离心5 min,取上清为模板作PCR。