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yingcun

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于毕赤酵母

毕赤酵母GS115菌落PCR,网上查到微波炉法和水浴法。直接挑菌体在EP管微波炉加热5min,pcr后跑出的胶什么都没有; 还试过把液体菌水浴加热,但还是pcr后什么条带都出不来。到底是为什么?或者还有什么方法么?
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-06 08:46:31
引用回帖:
Originally posted by yingcun at 2011-05-05 16:41:02:
毕赤酵母GS115菌落PCR,网上查到微波炉法和水浴法。直接挑菌体在EP管微波炉加热5min,pcr后跑出的胶什么都没有; 还试过把液体菌水浴加热,但还是pcr后什么条带都出不来。到底是为什么?或者还有什么方法么?

推荐煮一冻一煮法。
将1mL菌液2 500 X g离心5 min,弃上清,沉淀中加入500 uL TE悬浮沉淀,2500Xg离心3m in;弃上清,重复一次,最后沉淀溶于100 uLTE,沸水浴10 min,-20℃冷冻30 min,再次沸水浴10 min,2 500 X g离心5 min,取上清为模板作PCR。
4楼2011-05-06 07:42:41
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-05 16:51:26
yingcun(金币+2): 2011-05-07 09:50:21
挑取菌落于无菌水中稀释,99°水浴5分钟后立即放-80冰箱放置10min,重复三次。如果还想效果好点,建议99°水浴前先加Zymolyase或溶菌酶37°反应至少半小时。
仕不可不弘毅,任重而道远
2楼2011-05-05 16:47:54
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yingcun

新虫 (初入文坛)

是不是水浴法效果不好?还是的确做不出来?
3楼2011-05-05 16:53:34
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hulanzi

新虫 (初入文坛)

我是直接挑毕赤酵母菌斑,直接加到pcr体系里,先能扩出来,后来就不知道为什么扩不出来了
5楼2011-06-10 16:27:07
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