| 查看: 1551 | 回复: 1 | ||
jsjjqc金虫 (小有名气)
|
[求助]
蛋白酶水解实验设计方案讨论
|
|
实验需要用商用蛋白酶(枯草杆菌提取的混合蛋白酶)对常见的几种蛋白质进行水解，并找出最佳水解条件，目标是实现完全眉水解。实验方案是在50度下pH=8左右向标准牛血清蛋白或者酪蛋白溶液引入蛋白酶溶液（磷酸氢钾缓冲溶液中加入2mMCaCl2作为辅酶），水解24h后，加入三氯乙酸溶液（最终工作浓度为7.5%， v/w）将未水解的蛋白质沉淀，然后过0.45滤膜后测定滤液中的总氮。根据水解后滤液中测定的氮与原标准蛋白溶液的总氮的比值计算作为蛋白酶水解的氮回收率（方法是过硫酸钾氧化测定总氮法）。 现在实验结果遇到几个问题： 1.请问从整个实验方案看来，有无硬伤比较不合理的地方？ 2.初始标准蛋白浓度约为12 mg/L(v/w)，为何加入三氯乙酸溶液后，整个体系无絮状沉淀，滤膜上也没有可见沉淀，是因为蛋白浓度太低导致沉淀下来的蛋白肉眼无法看到吗？当然我需要做一组对比验证无蛋白酶添加下初始蛋白是否能全部沉淀。 3.做了预实验，发现最终蛋白酶工作浓度在0.5 units/ml下，氮的回收率仍较低，只有10%左右，原因一直没想明白。。请问理论条件下，加入足够的蛋白酶，是不是能达到近乎100%的氮回收率？看到有一些文献报道在鱼肉提取蛋白中加入蛋白酶水解，其氮回收率可以达到90%以上。 想请大家帮我解答下，谢谢各位学长指导！感激不尽！谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有199人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 角蛋白酶和碱性蛋白酶哪种对羽毛的水解效果更好
已经有8人回复
- 用木瓜蛋白酶水解乌鸡肉,没有出现分层,什么原因呢?
已经有5人回复
- 【求助/交流】如何筛选酸性蛋白酶高产菌株，制定筛选方案
已经有11人回复
- 【求助】蛋白酶在水解蛋白的过程中pH的变化及对水解程度的影响
已经有9人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌表达系统蛋白酶对目的蛋白的水解问题
已经有11人回复
- 谁做过考马斯亮蓝测定蛋白酶活性的实验啊？？
已经有16人回复
2楼2011-07-22 16:21:27
