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nayitian_nan

木虫 (小有名气)

[求助] 镰刀霉或黑曲霉的分泌蛋白相关问题

我现在打算提取镰刀霉和黑曲霉的分泌蛋白,就是粗提,然后跑电泳看条带,与我之前实验提取蛋白作对比。之前没有接触过霉菌分泌蛋白这方面,计划用固态发酵法,在麸皮上培养,请问,大概的方法是什么呢?或者说,有没有别的方法,不在麸皮上培养呢?谢谢大家了~
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其实,猪也有理想
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nayitian_nan

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by duxiaom at 2011-05-04 10:22:05:
我做的也是固态发酵,分离提纯是个大问题,什么葡聚糖凝胶、电泳什么的都不太懂

电泳的好说,现在就是在找个固体介质,能让我的霉菌附着在上面,然后生长,提取蛋白,你固态发酵,提取的是什么呢?
其实,猪也有理想
3楼2011-05-04 12:22:07
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nayitian_nan

木虫 (小有名气)

补充一下啊,打算利用羧甲基纤维素钠或者棉花作为霉菌生长的支撑物,然后添加霉菌的生长因子,但不知道具体怎么弄,有点苦恼啊
其实,猪也有理想
5楼2011-05-05 17:52:46
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nayitian_nan

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zhmdwf at 2011-05-05 18:04:17:
建议先把纤维素粉碎,做液体培养,好提取,天然基质成分复杂,不太好说明问题。

提取分泌蛋白,培养基是个问题,不能引入外源蛋白质,你能把你的方法说的再详细一点吗?谢谢了
其实,猪也有理想
9楼2011-05-05 23:15:11
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nayitian_nan

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-06 00:51:00:
羧甲基纤维素钠做固体支撑物?我孤陋寡闻没听说过,有人做过这个实验了吗?从什么地方得出这个想法的?

见笑了,主要是考虑要提取霉菌的分泌蛋白,固体培养基不能含有蛋白,所以有朋友这么建议,他当初想做类似实验,那时候想出的这么一个办法,不过没有实施,我也是第一次听说。
    不知道可行不,觉得将麸皮等蒸煮后,应该能把里面残存的糊粉层去掉。
其实,猪也有理想
11楼2011-05-06 11:57:21
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nayitian_nan

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-06 00:51:00:
羧甲基纤维素钠做固体支撑物?我孤陋寡闻没听说过,有人做过这个实验了吗?从什么地方得出这个想法的?

刚才回帖时候大意了,你已经做对培养基过灭菌后的检测了,我想我也这么试试
其实,猪也有理想
12楼2011-05-06 12:05:08
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nayitian_nan

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zhmdwf at 2011-05-06 21:24:45:
可以非蛋白氮源液体培养,可以提前或对数生长期加入诱导物,可以timecource酶活力高时,收集上清液,低温丙酮或盐溶液蛋白,得粗蛋白,如果纯化要过层析柱。多看看文献,要不同的菌株摸索条件的。一般拟合一个 ...

恩,自己摸索条件,这个我明白,谢了
其实,猪也有理想
14楼2011-05-06 22:21:59
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