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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 镰刀霉或黑曲霉的分泌蛋白相关问题
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nayitian_nan

木虫 (小有名气)

[求助] 镰刀霉或黑曲霉的分泌蛋白相关问题

我现在打算提取镰刀霉和黑曲霉的分泌蛋白，就是粗提，然后跑电泳看条带，与我之前实验提取蛋白作对比。之前没有接触过霉菌分泌蛋白这方面，计划用固态发酵法，在麸皮上培养，请问，大概的方法是什么呢？或者说，有没有别的方法，不在麸皮上培养呢？谢谢大家了~
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其实，猪也有理想
1楼 2011-05-03 12:11:59
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duxiaom

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

nayitian_nan(金币+2): 虽然没有解决问题，但是大家交流一下还是好的~~ 2011-05-05 12:14:28
我做的也是固态发酵，分离提纯是个大问题，什么葡聚糖凝胶、电泳什么的都不太懂
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2楼2011-05-04 10:22:05
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nayitian_nan

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by duxiaom at 2011-05-04 10:22:05:
我做的也是固态发酵，分离提纯是个大问题，什么葡聚糖凝胶、电泳什么的都不太懂

电泳的好说，现在就是在找个固体介质，能让我的霉菌附着在上面，然后生长，提取蛋白，你固态发酵，提取的是什么呢？
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其实，猪也有理想
3楼2011-05-04 12:22:07
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duxiaom

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by nayitian_nan at 2011-05-04 12:22:07:
电泳的好说，现在就是在找个固体介质，能让我的霉菌附着在上面，然后生长，提取蛋白，你固态发酵，提取的是什么呢？

纤维素酶。
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4楼2011-05-05 14:42:29
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nayitian_nan

木虫 (小有名气)
补充一下啊，打算利用羧甲基纤维素钠或者棉花作为霉菌生长的支撑物，然后添加霉菌的生长因子，但不知道具体怎么弄，有点苦恼啊
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其实，猪也有理想
5楼2011-05-05 17:52:46
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zhmdwf

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
nayitian_nan(金币+3): 有点帮助，还有疑问呢 2011-05-05 23:09:44
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-05-06 16:47:01
建议先把纤维素粉碎，做液体培养，好提取，天然基质成分复杂，不太好说明问题。
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6楼2011-05-05 18:04:17
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★
rainwander(金币+3): 鼓励交流 2011-05-06 16:47:14
固态发酵确实基质里也有蛋白质的，就是多还是少的差别了。我用新鲜配置好的培养基121度灭菌20分钟，超纯水浸泡，得到的浸泡液用Sephadex G25脱盐，看得出在盐峰之前有一个蛋白质峰，盐峰之后的引起A280光吸收的可能是色素或者什么有大派键的东西。我的配方是12克麦麸，2.4克花生麸（80目），7.2克超纯水。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2011-05-05 21:19:14
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★
nayitian_nan(金币+5): 谢谢你的回复，我还有点问题，就是能不能用羧甲基纤维素钠做固体支撑物，然后配撒培养基上去呢？ 2011-05-05 23:19:34
rainwander(EPI+1): 2011-05-06 16:47:25
rainwander(金币+3): 鼓励交流 2011-05-06 16:47:33
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-05 21:19:14:
固态发酵确实基质里也有蛋白质的，就是多还是少的差别了。我用新鲜配置好的培养基121度灭菌20分钟，超纯水浸泡，得到的浸泡液用Sephadex G25脱盐，看得出在盐峰之前有一个蛋白质峰，盐峰之后的引起A280光吸收的可 ...

固态发酵确实基质里也有蛋白质的，就是多还是少的差别了。我用新鲜配置好的培养基121度灭菌20分钟，超纯水浸泡，得到的浸泡液用Sephadex G25脱盐，看得出在盐峰之前有一个蛋白质峰，盐峰之后的引起A280光吸收的可能是色素或者什么有大派键的东西。我的配方是12克麦麸，2.4克花生麸（80目），7.2克超纯水。

直接回复不能上图，我只能这样回复，我上一次的回复作废，这次才是完整的回复。
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8楼2011-05-05 21:28:02
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nayitian_nan

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhmdwf at 2011-05-05 18:04:17:
建议先把纤维素粉碎，做液体培养，好提取，天然基质成分复杂，不太好说明问题。

提取分泌蛋白，培养基是个问题，不能引入外源蛋白质，你能把你的方法说的再详细一点吗？谢谢了
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其实，猪也有理想
9楼2011-05-05 23:15:11
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
羧甲基纤维素钠做固体支撑物？我孤陋寡闻没听说过，有人做过这个实验了吗？从什么地方得出这个想法的？
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10楼2011-05-06 00:51:00
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