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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » TA克隆之疑问
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南海所老龚

新虫 (正式写手)

[求助] TA克隆之疑问

各位大虾好！

同时做了2个不同的TA克隆，实验手段与材料均一致，唯一不同的是目的片段且目的片段长度差不多，结果一个克隆成功另一平板什么都没有。

问题：为什么另一个平板什么都没有了？如果是连接不上的话应该也有蓝斑显示啊？求详解，不胜感激。
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TheBestandMostBeautifulThingsintheWorldCan'tBeSeenorTouched,TheyMustBeFeltwithHeart.
1楼 2011-05-02 10:37:23
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beibei9535

荣誉版主 (职业作家)

晕晕小版主~ 姑娘你好！

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 继续加油啊 2011-05-02 12:27:18
南海所老龚(金币+1): 2011-05-02 15:50:43
重新做一遍。
第二，加A了吗？


其实做一遍不见得就说明问题，在试试呢，如果在处问题，可能要仔细找了。
我觉得问题不大~
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最好的年龄是，那一天，终于知道并且坚信自己有多好，不是虚张，不是夸浮，不是众人捧，是内心明明澈澈知道：是的，我就是这么好。
2楼2011-05-02 11:28:21
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南海所老龚

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by beibei9535 at 2011-05-02 11:28:21:
重新做一遍。
第二，加A了吗？


其实做一遍不见得就说明问题，在试试呢，如果在处问题，可能要仔细找了。
我觉得问题不大~

PCR产物含有A末端
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TheBestandMostBeautifulThingsintheWorldCan'tBeSeenorTouched,TheyMustBeFeltwithHeart.
3楼2011-05-02 12:31:17
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
1949stone(金币+1): 好西瓜 2011-05-02 14:25:26
引用回帖:
Originally posted by 南海所老龚 at 2011-05-02 10:37:23:
各位大虾好！

同时做了2个不同的TA克隆，实验手段与材料均一致，唯一不同的是目的片段且目的片段长度差不多，结果一个克隆成功另一平板什么都没有。

问题：为什么另一个平板什么都没有了？如果是连接不上的 ...

光凭这些信息还是不好判断呢，方便的话最好说得详细些哦
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4楼2011-05-02 12:56:57
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

实验不仅仅是理论和技术，还要有人品和运气
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5楼2011-05-02 18:05:57
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yoyoyoyo3985

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励分享经验 2011-05-03 18:00:13
做了两个月的Ta克隆，有时候长斑，有时候不长，蓝白斑筛选不到蓝斑。到最后才从80个斑里筛到了一个阳性克隆，实验的偶然性还是很大的，不妨重做一遍。
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难免埋怨时间的手，把相爱写成相爱过
6楼2011-05-03 13:35:23
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nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)
....做过1周的T克隆..。大概挑过300个克隆，测序用，我的实验中用于突变验证。
蓝白都有，白多蓝少，感觉如果试剂+细菌的质量过关，不会出现什么问题。
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生活是美好的
7楼2011-05-03 15:37:44
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amilie030312

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不长斑的原因很多的啦，不能这样一句带过，而且分子生物学本身就是个看似简单但非常复杂的问题，一步一步找原因吧。
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8楼2011-05-03 16:19:35
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫
引用回帖:
Originally posted by yoyoyoyo3985 at 2011-05-03 13:35:23:
做了两个月的Ta克隆，有时候长斑，有时候不长，蓝白斑筛选不到蓝斑。到最后才从80个斑里筛到了一个阳性克隆，实验的偶然性还是很大的，不妨重做一遍。

你真有耐心呀……估计你的T载体质量不行。
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仕不可不弘毅，任重而道远
9楼2011-05-03 18:57:04
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yoyoyoyo3985

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 墨香若水 at 2011-05-03 18:57:04:
你真有耐心呀……估计你的T载体质量不行。

一直没找到原因出在哪里，只能是优化条件啊……
做的痛苦
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难免埋怨时间的手，把相爱写成相爱过
10楼2011-05-04 22:24:07
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