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金虫 (正式写手)

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正如您所说，提取质粒后跑胶，附件是我提取质粒后的跑胶结果，泳道1、2是从BL中提取的质粒、泳道3是空质粒，泳道4是之前已经证明正确的重组质粒。从胶中看到从BL中提取的重组质粒要比空质粒慢些，能初步说明构建成功了吗？但是感觉泳道1
、2与之前构建的质粒也不是完全一样。看来，我应该听您的，试着酶切再验证下，先不进行PCR了。但是我还有个问题，PCR为什么会假阳性较多呢？我之前一直以为PCR的准确性反而最好，小女才疏学浅，希望指点迷津，谢谢了！

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11楼2011-04-28 17:45:36

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天使托

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T.Shen

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1949stone(金币+2): 最喜欢交流 2011-04-28 19:05:00

引用回帖:

Originally posted by yuxia82012 at 2011-04-28 16:52:45:
我觉得验证这种重组质粒最好先快检一下然后再提质粒酶切，没必要直接PCR。
快检就是直接用摇起的菌液取100uL，加50uL的苯酚和50uL的氯仿涡旋离心，取上清跑胶，对照上个空载体，就是没有连片段前的质粒（环合的哈 ...

快检？
我们实验室从没有提起过。。。这个方法是不是很迅速呢？
就是按照您所说的来做吗？取上清一般多少跑胶呢？出来条带又怎样呢？

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