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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求PCR解！谢谢！
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wzc4884

金虫 (正式写手)
正如您所说，提取质粒后跑胶，附件是我提取质粒后的跑胶结果，泳道1、2是从BL中提取的质粒、泳道3是空质粒，泳道4是之前已经证明正确的重组质粒。从胶中看到从BL中提取的重组质粒要比空质粒慢些，能初步说明构建成功了吗？但是感觉泳道1
、2与之前构建的质粒也不是完全一样。看来，我应该听您的，试着酶切再验证下，先不进行PCR了。但是我还有个问题，PCR为什么会假阳性较多呢？我之前一直以为PCR的准确性反而最好，小女才疏学浅，希望指点迷津，谢谢了！
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11楼2011-04-28 17:45:36
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★
1949stone(金币+2): 最喜欢交流 2011-04-28 19:05:00
引用回帖:
Originally posted by yuxia82012 at 2011-04-28 16:52:45:
我觉得验证这种重组质粒最好先快检一下然后再提质粒酶切，没必要直接PCR。
快检就是直接用摇起的菌液取100uL，加50uL的苯酚和50uL的氯仿涡旋离心，取上清跑胶，对照上个空载体，就是没有连片段前的质粒（环合的哈 ...

快检？
我们实验室从没有提起过。。。这个方法是不是很迅速呢？
就是按照您所说的来做吗？取上清一般多少跑胶呢？出来条带又怎样呢？
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
12楼2011-04-28 18:00:47
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
1949stone(金币+4): 鼓励 2011-04-28 19:05:08
结果不明显，验证组与阳性对照差别太大，而且大小也不大对。
如果我做的话，会选择从头开始的。
PS：菌液PCR无疑是目前筛选最迅速的方法。准确性相对来说也是很高的。楼主方法没问题，继续坚持。可能是连接这块没做好。
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Thank-you，so-blue.
13楼2011-04-28 18:09:59
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-28 18:00:47:
快检？
我们实验室从没有提起过。。。这个方法是不是很迅速呢？
就是按照您所说的来做吗？取上清一般多少跑胶呢？出来条带又怎样呢？

我用的效果挺好的，一般取50uL跑胶吧，质粒条带很明显的
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在等待中涅槃重生
14楼2011-04-28 19:05:49
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